植物基因转化受体系统介绍.pptxVIP

第七章 植物基因转化受体系统;主要内容; 我国科学工作者，用转基因技术，可以转变矮牵牛花的花色，使矮牵牛花的花色更加丰富多彩。 ;转基因油菜 ????油菜是人们食用油的主要来源之一。一般油菜籽的含油量约为40％左右。通过转基因技术，培育出来的油菜籽，可以大大地提高它的出油率。而且油的纯度质量更好;转基因小麦 ????从植物体中分离出合成赖氨酸的基因，把这基因转入小麦植株中，培育出转基因小麦。用这种转基因小麦制造出来的面粉，更适合用来烤面包，而且面粉中赖氨酸含量高，这种面包的营养价值高。 ;第一节 植物基因转化受体的条件;;;;农杆菌敏感性;第二节 植物基因转化受体的类型及其特性;特点;注意问题;不经过愈伤组织的受体系统;特点;注意问题;原生质体再生系统;特点;细胞系及其体细胞胚受体系统;特点;生殖细胞受体系统;特点：;第三节 植物基因转化受体系统的建立;一、高频再生系统的建立;外植体的选择;培养基的选择;二、抗生素敏感性;三、农杆菌敏感性试验;第四节 受体系统常见的问题及其解决途径;;1、以原生质体或细胞为受体的直接基因转移;PEG介导的基因转化 利用化学试剂，如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、多聚-L-鸟氨酸(pLO)和磷酸钙等，诱导原生质体摄取外源DNA分子，进入原生质体的外源DNA分子就有可能通过某种机制整合到基因组中，完成遗传转化过程。 第一例成功的转基因烟草就使用该转化方法获得的。; ;显微注射介导的基因转化 利用显微注射仪将外源DNA直接注入受体的细胞质或细胞核，从而实现外源基因的转移。 特点：方法简单、转化率高；适用于各种植物和材料，无局限性；对受体细胞无毒害。 激光微束介导的基因转化 将激光引入光学显微镜聚焦成微米级的微束照射培养细胞，在细胞膜上形成能自我愈合的小孔，使加入细胞培养基里的外源DNA流入细胞，实现基因的转移。 优点：操作简便；工作效率高；适应于各种动植物；受体的类型广泛；用于细胞器的基因转化。;基因枪法(particle gun) 将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下将微粒高速射入受体细胞或组织，微粒上的外源DNA进入细胞后，整合到植物染色体上并得到表达，从而实现外源基因的转化。 根据基因枪的动力系统，分为3种类型 火药爆炸力为加速动力，采用塑料子弹和阻挡板。塑料子弹前端载放着DNA包裹的钨/金粉。 高压气体作为动力，如氦气、氢气、氮气等。把载有DNA的钨/金粉铺洒在一张微粒载片上，在压缩空气的冲击下，驱动载片，当载片受阻于金属筛网时，载有DNA的钨/金粉继续向下冲击射入细胞。 高压放电为驱动力，可以无级调速，通过变化工作电压，使载有DNA的钨/金粉粒子能达到目的细胞层。;PDS-1000/He系统;;基因枪的操作步骤 DNA微弹的制备：金粉或钨粉50~100mg、DNA、CaCl2、PEG4000和亚精胺 靶外植体材料准备 DNA微弹轰击 轰击后外植体的培养 转化率及其影响因素 金属微粒的影响 DNA沉淀辅助剂的影响 DNA的纯度及浓度对转化率的影响 微弹速度的影响 植物材料的内在因素的影响;2、载体介导的基因转化;根癌农杆菌介导法 植物冠瘿瘤－植物的一种癌症 冠瘿瘤的起因：由根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)[属根瘤菌科(Rhizobiaceat)]对植物的侵染而引起 冠瘿瘤的侵染过程：细菌通过伤口进入植物，在基因水平上转化植物。细菌DNA中的编码基因在植物细胞中表达，刺激植物细胞不受控制的分裂，形成瘤。 ;Ti质粒(Tumor inducing plasmid) Ti质粒是根癌农杆菌染色体外的遗传物质，为双股共价闭合环状DNA分子，其分子量为95～156× 106D，约有200kb。 Ti质粒的类型： 根据冠瘿瘤合成的冠瘿碱种类不同分为： 章鱼碱型 (octopine) 胭脂碱型 (nopaline) 农杆碱型 (agropine) Ti质粒的基因结构：T-DNA区、Vir区、Con区和Ori区共4个区段。 ;Ti质粒的遗传特性 T-DNA区 (transfer DNA region) Ti质粒中的一部分DNA片段，进入寄主细胞并插入基因组中，能够利用植物的酶系统进行转录和翻译，其表达产物可诱发植物产生肿瘤。 T-DNA区结构特征： 左右两端边界各有一个25bp长的正向重复序列(Lb和Rb) ，具有高度保守性。 右边界突变和缺失导致转移能力降低或丧失。 T-DNA以单拷贝或多拷贝的形式随机整合到植物染色体DNA上。;胭脂碱T-DNA (23kb) pTiC58 章鱼碱T-DNA (13.6kb) pTiAch5 ;V