大鼠精子发生相关基因rtSH3p13功能研究.pdf

中国协和医科大学博士研究生论文 【中文摘要】 本文基于上述研究结果开展了rtSH3p13基因的功能研究。我们采用 GST-pull l的体 载体，将其转染入CHO细胞。运用细胞免疫荧光结合激光共聚焦技术分别 在CHO细胞和生精细胞中观察到rtSH3p13蛋白与内吞相关蛋白呈现共定 位。此外，我们发现rtSH3p13蛋白分布于精子发生各个阶段的精子细胞的 处于不同形成阶段的顶体区，说明该蛋白可能参与了顶体的形成。 为了解rtSH3p13蛋白分子各个区段在参与内吞过程中的作用，根据竞 争性抑制的原理，我们构建了rtSH3p13蛋白的节段性系列缺失体，即将 过量表达含有V区和SH3区的蛋白以后，CHO细胞中的EGFR介导的内吞 过程被阻断。 原代细胞培养是细胞生物学的一项重要的实验技术。在体外进行生精 细胞的原代培养并进行转染，对于研究精子细胞特异基因的功能具有重要的 意义。目前对生精细胞的体外培养以及转染在方法上尚处于探索阶段。在本 研究中对体外培养生精细胞进行了尝试，并且用构建的rtSH3p13基因的节 段性缺失体转染了生精细胞，发现在过量表达了v区和SH3区蛋白后，生 精细胞中的网格蛋白复合体的功能受到明显影响，从另一个侧面证实了 rtSH3p13基因的功能。 鉴于网格蛋白复合体与PI．3K的密切关系，我们对rtSH3p13在信号传 导通路中的作用进行了初步研究。结果发现PI．3K可能影响rtSH3p13蛋白 的功能。 rtSH3p13基因是一种睾丸组织特异性基因，为了进一步功能研究的需 中的稳定表达细胞系，为进一步研究奠定了良好的基础。 在生精细胞中同样存在着大量的运输囊泡，它们对于精子细胞中的蛋 中国协和医科大学博士研究生论文 【中文摘要】 白质转运以及顶体的形成有着至关重要的意义。但是对于这一过程的具体机 制目前还缺乏系统的研究。我们的研究结果表明rtSH3p13蛋白在生精细胞 中参与了网格蛋白复合体介导的蛋白质转运过程，其功能对于生精细胞中的 内吞过程以及顶体形成过程至关重要，并且其功能可能受到了PI．3K的调 节。对于rtSH3p13基因功能的深入研究将有助于揭示生精细胞中囊泡转运 的分子生物学机制。 中国协和医科大学博士研究生论文 【英文摘要】 ABSTRACT isaseriesof ordered whichinvolves highly Spermatogenesis process many under and genesexpressionprecisetemporalspatialregulation．Thecloning tO andidentificationofthese isof value differentiallyexpressedgenes great of delineatethemechanism spermatogenesis． A as isolated rat cDNA froma testis eDNA，designatedrtSH3p13，was consistedof1463 an