nNOS在小鼠心肌缺血再灌注损伤与缺血预处理中的作用机制研究.pdf

·中文论著摘要· nNOS在小鼠心肌缺血再灌注损伤和缺血预处理中的 作用机制研究 刖吾 心肌梗死是当今世界最常见的心血管事件之一，治疗时恢复血流灌注却可能 oxide 因为活性氧的产生等而导致缺血再灌注损伤。一氧化氮合酶(Nitricsynthase， NOS)可通过催化产生NO而促进血小板和中性粒细胞粘附聚集；调节冠状动脉血 流；并在心跳节律和心肌收缩性方面发挥重要的作用。目前认为，NOS可分为三 nitricoxide 种类型：诱导型NOS(Inducible nitricoxide nitricoxide synthase，eNOS)和神经元型NOS(Neuronalsynthase， nNOS)。 NOS在缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusioninjury，IRI)中的作用目前颇 有争议。大部分数据显示NOS在缺血再灌注损伤中起保护作用。通过药物抑制或 者基因敲除的办法去除iNOS或者eNOS能加重心肌缺血再灌注损伤。与此相反， 另一些实验却发现去除iNOS或eNOS对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。研究 显示活性氧(Reactive oxygenspecies，ROS)，如超氧阴离子和过氧亚硝酸根离子 在调节心肌缺血再灌注损伤中发挥了重要作用。许多研究证明NOS激活可增加过 氧亚硝酸根离子产量，过氧亚硝酸根离子是NO和超氧阴离子反应产生的，这可 能是NO导致心肌缺血再灌注损伤的主要原因。有证据证明：nNOS在调节心脏心 率，钙循环，钠转运和能量代谢等方面发挥关键作用，然而其在心肌缺血再灌注 损伤中的作用不甚明了。离体心脏缺血再灌注实验显示，野生型和nNOS士小鼠心 肌梗死面积无显著差异，但是在nNOS小组心肌梗死面积有减小趋势(33％VS 30％，p0．05)。 有关NOS在心脏缺血预处理(Ischemic 个不同的阶段：在2．3小时的快速发展阶段，和12—24小时后，甚至72小时的延 在lP的延迟期发挥保护作用。最近的研究也发现，在兔IP的延迟期的终末阶段， nNOS与还氧化酶．2共同作用发挥保护作用。然而，nNOS是否参与早期IP仍有 争议。 尽管nNOS在调节心脏功能方面发挥重要作用，然其在心肌缺血再灌注损伤 中的作用和在早期IP时对心脏的作用还不明晰。因而本研究我们主要通过观察 nNOS基因敲除小鼠，nNOS抑制剂和自由基清除剂对小鼠心肌缺血再灌注损伤和 缺血预处理的影响，观察nNOS在心脏缺血再灌注和缺血预处理时的作用，为深 入研究nNOS在心肌缺血性疾病中的作用机制提供重要的理论和实验依据。 材料和方法 一、实验动物与分组 12周龄nNOSKO鼠和C57BL／6d、鼠(wild type，WT)由日本香川大学医学 SHAM)，野 部和中国医科大学实验动物部提供。实验分为野生型假手术组(WT IR+ 生型缺血再灌注组(WTIR)，野生型缺血再灌注L．VNIO处理组(wT L—VNIO)，野生型缺血再灌注MnTBAP处理组(wT IR)，nNOS 敲除鼠假手术组(KOSHAM)，nNOS基因敲除鼠缺血再灌注组(KO 基因敲除鼠缺血再灌注MnTBAP处理组(KOIR+MnTBAP)，野生型缺血预处理 组(WTIP)，野生型缺血预处理L．VNIO处理组(WT IP)。 因敲除鼠缺血预处理组(KO 二、实验方法 (一)小鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备