MicroRNA在大鼠坐骨神经损伤修复中的有效性研究讲述.pptxVIP

王建勇 敖强 韦玉军 龚锴 中国医科大学组织工程教研室 清华大学医学中心 2015年11月01日 MicroRNA-338在大鼠坐骨神经损伤修复中的有效性研究 自体移植 神经修复导管 分子生物治疗 国外研究 国内研究 周围神经修复研究背景 MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子，它们在动植物中参与转录后。到目前为止， 在动植物以及病毒中已经发现有28645 miRNA 分子。大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因基因簇(cluster) 的形式存在于基因组中 miRNA对周围神经损伤修复研究背景 目前，国内外学者研究miRNA对周围神经损伤修复影响的研究主要集中在两个方面：一是在细胞水平研究miRNA对雪旺细胞增殖、迁移髓鞘化和/或神经元轴突延长的影响；有研究表明，miRNA338能够促进雪旺细胞增殖及促进体外培养的DRG髓鞘化；二是研究坐骨神经损伤后脊髓、DRG、坐骨神经以及其支配的肌肉中相关miRNA表达的变化情况，对如何利miRNA治疗坐骨神经修复损伤以及体内评估miRNA促进坐骨神经损伤修复的治疗效果方面仍然是空白。 实验方法 实验方法 行为学 影像学 电生理 组织学 透射电镜 免疫荧光 结 果 行为学观察 A～D：术后8周空病毒对照组大鼠体征，术侧后肢握力不强，不能较好的伸展，行走时被动拖曳足背，并且有自残倾向（箭头所示）。 F～I ：术后8周mir-338实验组大鼠体征，术侧后肢握力较好，能够主动伸展伸直，并且奔跑中活动自如（箭头所示）。 坐骨神经功能指数（SFI） SFI=-38.3(EPL-NPL)/NPL+109.5(ETS-NTS)/NTS+13.3(EITS-NITS)/NITS-8 0表示功能正常，-100表示坐骨神经功能完全丧失。 核磁共振 A～B:mir-21实验组壳聚糖导管桥接，能明显看到导管位置，神经通过导管生长良好。 C～D:对照组导管下游没有看到明显的神经生长 电生理 大鼠术后2个月检测到的神经-肌肉动作电位 （CMAPs）A:GFP空病毒对照组；Bmir-338慢病毒实验组：；C：正常神经组；D：坐骨神经传导速度 B HE和乙酰胆碱酯酶染色 A-C：8周后各组大鼠术侧腓肠肌HE染色，A对照组横纹肌走行不规则，细胞核排列紊乱；B实验组横纹肌较规则，细胞核分布均匀；C正常组横纹肌走行连续，排列规则； D-F：8周后各组大鼠术侧腓肠肌乙酰胆碱酯酶染色，D对照组乙酰胆碱酯酶减少，肌纤维较不规则；E实验组乙酰胆碱酯酶较多，肌纤维走行比较规则；F正常胆碱酯酶染色，数量较多，排列整齐； 甲苯胺蓝染色 术后第8周各组再生神经组织和正常神经组织半薄切片甲苯胺蓝染色。Bar=50um A： GFP空病毒对照组；B：mir-338慢病毒实验组；C：正常神经组织；D：坐骨神经轴突直径长度 电镜 …… 术后第8周各组再生神经组织和正常神经组织超薄切片透射电镜观察。A：GFP空病毒对照组；B：mir-338慢病毒实验组；C：正常组；D：各组髓鞘厚度百分比分布 免疫组织化学染色 术后8周各组再生神经远端组织和正常神经组织的免疫组化观察。a1-a3:正常神经b1-b3：mir-21慢病毒组；c1-c3：空病毒对照组；红色的为NF-200免疫组化染色，绿色的为S100免疫组化染色。标尺为10 μm How do this function? Hes5 Sox6 PMP22 S-100 MBP P0 Sox10 Sox11 观察 预测 appreciation 感谢 敖强教授 韦玉军 原晓晶 季玉陈 龚锴 张明 THANKS