实训指导材料-牛乳中抗生素的检测资料.ppt

2. 食品中抗生素残留的检测 一、抗生素污染食物的途径 抗生素进入动物组织来自三方面的原因： 非治疗目的用药 治疗目的用药 非法掺杂 1．非治疗目的用药 （1）抗生素作为饲料添加剂，促进动物生长：我国常用饲料添加剂是土霉素、地霉素、金霉素和青霉素、链霉素， （2）抗生素用于动物的人工授精。 （3）抗生素用于植物防病和刺激生长。 （4）抗生素用于食品保藏 （5）抗生素通过挤乳器污染生奶 2．治疗目的用药 二、食品中抗生素残留的危害性 1．过敏反应 2．细菌产生耐药性 3．菌群失调 4．影响食品加工 鲜乳中抗生索残留量检验 （一）设备和材料 水浴；温箱；100℃温度计；蜡笔；试管架；灭菌吸管：10mL、lmL； 灭菌试管：15×150mm。 （二）菌种、培养基和试剂 1. 菌种：嗜热乳酸链球菌。 2. 脱脂乳：经113℃灭菌20min。 3.4％2，3，5—氯化三苯四氮唑水溶液：称取1gTTC，溶于5mL灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于7℃冰箱保存，临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色，则不能再用。 （三）检验程序 （四）操作步骤 1.菌液制备 将菌种移种脱脂乳，经(36±1)℃培养15h后，以灭菌脱脂乳1：1稀释待用。 2.加检样 取检样9mL，置15×150mm试管内，80℃水浴加热5min冷却37℃以下，加菌液lmL。(36±1)℃水浴中培养2h，加TTC 0.3mL，(36±1)℃水浴中培养30min，观察如为阳性，再于水浴中培养30min作第二次观察。 每份检样作两份，另外再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用无抗生素的乳8mL加抗生素及菌液和TTC。阴性对照管用无抗生素乳9mL加菌液和TTC。 3.判断方法 准确培养30min观察结果，如为阳性，再继续培养30min作第二次观察。观察时要迅速，避免光照过久发生干扰。 乳中有抗生素存在，则检样中虽加入菌 液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC不还原，不显色。 与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即行增殖，TTC被还原而显红色。也就是说检样呈乳的原色时为阳性，呈红色为阴性。 表12-1显色状态判断标准 * 主讲：汪清美 生产者为了防止牛奶酸败而非法掺入各种抗生素。 3.非法掺杂 氯化三苯四氮唑法(TTC法)原理 细菌生物氧化有三种方式，即加氧、脱氢和脱电子，相反即还原。当乳中加入嗜热链球菌后，如乳中无抗生素，其中脱出的氢可以和加在乳中的氧化型TTC结合而成为还原型TTC， 氧化型TTC是无色，还原型TTC是红色，所以可使乳变红色。 相反，如乳中存在抗生素，嗜热链球菌就不能生长繁殖， 没有氢释放，TTC也不被还原，仍为无色，乳汁也无色。 显色者 抗生素阴性 检样 80℃，加热5min 冷却至37℃以下 红色 加菌液，36±1℃水浴2h 抗生素阴性 不显色 报告 36±1℃水浴30min 不显色者 抗生素阳性 报告 加TTC指示剂，36±1℃水浴30min 阳性 可疑 阴性 未显色者 微红色者 桃红色 红色 判断 显色状态 *