免疫金标记技术(研究生讲义)综述.pptVIP

* * * * 　　 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 竞争法 标本 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：标准抗原 吸水纸 阳性结果 * 标本 G区：金标特异性抗体(兔型) C区：羊抗兔Ig T区：标准抗原 吸水纸 阴性结果 * 间接法－反流免疫层析法 ③ ⑤合上检测盒 窗(B) 吸水材料(A) 金标抗人IgG(G0) 吸水材料(D) 吸水材料(F) 标本加样区(E) 包被抗原（T） ① ② 标记线(G) ④ ⑥ ⑥液体流动方向 包被抗抗体（C） * 标本 C T C T 闭合前 闭合后 E 阳性结果 * C T * DIGFA与GICA的比较 DIGFA （穿透滤过型） GICA （横向流动型） 硝酸纤维素膜的种类 圆片膜 窄长型膜 试剂形式 渗滤装置及2瓶液体试剂（液相形式 ） 单一试剂条(板)（固相形式 ） 操作步骤 3 1 观察时间 操作结束(约3min)即刻观察 操作结束后 等待3-20min * IFA 穿流（FLOW THROUGH） ICA 横流（LATERAL FLOW） * 免疫金标记技术的优势 示踪剂：以胶体金为指示剂，本身形成免疫分析过程后的颜色标记 自带质控对照 简便、快速：全部检测过程仅需 3-20分钟。 可单份检测 稳定性好 * 免疫金标记技术的劣势 灵敏度不如酶标技术 一般作为定性，不易定量。 金标法在临床中的应用 实例1：HBsAg的检测 实例2：HCG的检测 * 金免疫组织化学技术 一、免疫金（银）光镜染色技术 二、免疫金电镜染色技术 * ????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 　　 免疫金银染色原理示意图 　　 * * HBsAg诊断试剂 试剂盒参考图示 * 操作 步骤1：洗净双手 步骤2：用采血针采指尖血 步骤3：将1滴指尖 血滴入加样孔 ，或 者用吸管将1滴指尖 血滴入加样孔 * 步骤4：立即加1-2滴缓冲液 步骤5：15分钟读取结果 * ??结果 ??结果 * 早孕胶体金法检测试剂 步骤１:从包装铝箔袋 中取出试纸条 步骤２:将试纸条按箭头 方向插入尿液标本中 步骤３:至少5秒后取出 放于干净平台上或放在 尿杯中读结果。测试结 果应在3分钟读取. * * * * * * * * * * * * * * * * 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) * 免疫技术 试剂 标本 Ag Ab Ab Ag * 标记免疫技术 试剂 标本 Ag* Ab Ab* Ag 放射性核素 荧光素 酶 化学发光剂 胶体金 标记物 技术 放射性核素 放射免疫技术 荧光素 荧光免疫技术 酶 酶免疫技术 化学发光剂 化学发光免疫技术 胶体金 金免疫技术 * 金免疫测定技术 金免疫组织化学染色技术 金免疫技术 斑点金免疫渗滤试验 金免疫层析试验 金免疫光镜染色技术 金免疫电镜染色技术 * 简介 胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒； 当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点(线); 从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。 金免疫组织化学染色技术 金免疫测定技术 * * 制备 胶体金 制备 免疫金 建立 金免疫测定技术 * 胶体金的特性 胶体金（金溶胶）：是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。 胶体金的特性 胶体性质：稳定性、对电解质的敏感性 光吸收性和呈色性：胶体金的光吸收峰波长随颗粒的大小而变化。 稳定性：影响因素---电解质、溶胶浓度、温度、稳定剂 * 呈色性 不同大小的胶体金呈现不同的颜色 小颗粒--橙黄色 　中等颗粒—酒红色 较大颗粒—深红色 　大颗粒—紫色 * 胶体性质 稳定性：稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮于液体中 * 1％柠檬酸三钠加入量（ml）* 胶体金特性 λmax 呈色 ? 16 2.00 橙色 518nm 24.5 1.50 橙红 522nm 41 1.00 红色 525nm 71.5 0.70 紫色 535nm 胶体金 粒径（nm） * 胶体金的制备 化学