Oct4论文：Oc4 Sox2 穿膜肽 重组蛋白 E.coli 红鳍东方鲀精巢细胞.docVIP

Oct4论文：Oct4 Sox2 穿膜肽 重组蛋白 E.coli 红鳍东方鲀精巢细胞 【中文摘要】重编程因子Oct4与Sox2作为转录因子,可通过开启相关基因的转录诱导体细胞的重编程,在诱导型多能干细胞(iPS细胞)的制备及相关研究中具有重要的应用价值。目前,获得哺乳动物iPS细胞的最安全的途径是直接导入外源重编程因子的编码蛋白。为了获得红鳍东方鲀精巢细胞的iPS细胞,为优质、高产、抗逆红鳍东方鲀的细胞工程育种奠定基础,本文利用pET32a与穿模肽构建出Oct4和Sox2的原核表达载体,通过转化大肠杆菌(E. coli) BL21诱导表达出其编码蛋白,经与体外培养的红鳍东方鲀精巢细胞系细胞共孵育将Oct4和Sox2的编码蛋白导入精巢细胞,并对导入编码蛋白的细胞内定位进行了检测。根据红鳍东方鲀基因组数据库中的已公布序列设计Oct4和Sox2引物,从红鳍东方鲀肝组织中克隆出Oct4和Sox2基因,在其两端分别引入BamH I和Kpn I限制性酶切位点,在合成的由11个精氨酸组成的细胞穿膜肽序列两端引入Kpn I和EcoR I限制性酶切位点,利用Kpn I酶切位点的粘性末端将穿膜肽序列分别连接到Oct4和Sox2基因的3’端上,进而利用Oct4和Sox2基因的BamH I酶切位点以及穿膜肽序列的EcoR I酶切位点将Oct4基因、Sox2基因和穿膜肽序列连到pET32a原核表达载体中,构