动物细胞工程具体到分参考资料.doc

动物细胞工程分值分布条 考试内容及分值 绪论（共2分） 动物细胞工程基础（共5分） 精子的形态与结构（2分） 1.细胞核——精子头部的主要部分 2.高尔基体——头部的顶体 3.中心粒——精子的颈部 4.线粒体——线粒体髓鞘，精子尾部中段 5.细胞内其他物质——原生质滴 哺乳动物精子主要由头部、颈部和尾部3部分组成 卵子的形态与结构（3分） 卵子发生场所：卵巢 动物细胞工程研究方法（共4分） 形态学技术（1分） 测定细胞大小，细胞计数，利用显微镜观察细胞形态，电子显微镜观察亚细胞结构，细胞膜的渗透性，细胞内氧化还原酶的原位显示 免疫组织化学技术（1分） 流氏细胞术（1分） 用途：对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术 梯度离心分离技术（1分） 利用颗粒大小的不同: 差速离心法（用于分离大小、形状显著不同的组分，根据颗粒沉降速度不同得以分离 ），速度区带离心法（用于分离密度相近而大小不一的组分） 利用颗粒密度的不同: 等密度离心法（按细胞组分浮力密度不同进行分离） 动物细胞培养（共25分）1.动物细胞培养技术中的相关概念（5分） 动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。主要有细胞培养与组织培养 原代培养：从体内取出组织或细胞接种培养到第一次传代的操作过程 传代培养：细胞培养增殖到一定密度时，将细胞重新悬浮，经稀释后接种到新的细胞培养瓶中的过程称为传代培养 细胞一代时间：指从细胞接种到下一次分离、悬浮再培养时的时间 细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系 细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞称为细胞株 细胞转化的检测：软琼脂培养法，浸润性检测法，异种动物接种检测法 动物细胞培养用液（5分） 培养基： 天然培养基（血清） 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限。成分复杂，影响实验产物的提取和实验结果的分析，合成培养基 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本低。 缺点：缺少某些成分，不能完全满足细胞生长需要。 无血清培养基，无血清培养基尚处于研究阶段，难以推广。 目前，绝大多数人工合成培养基使用时还需添加血清。 平衡盐溶液：BSS 是从Ringer 生理盐水发展起来的，主要由无机盐和葡萄糖组成。Hanks 液和Earle 液是配制各种培养液最常用的基础溶液 胰蛋白酶溶液：主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散抗生素液，消化细胞时，加入一些血清或含血清的培养液，或胰蛋白酶抑制剂能终止胰蛋白酶对细胞的继续作用。0.02％ EDTA 与胰酶液搭配使用可增强其消化效果 动物原代细胞培养（7分） 组织块原代培养 贴壁细胞原代培养 取材 单细胞分离 细胞计数 接种培养 贴壁细胞的传代 体外培养细胞的纯化 悬浮细胞的纯化：密度梯度离心。 依据贴壁速度的纯化：如巨噬细胞等。 依据对消化酶的敏感性 动物细胞传代培养及培养结果检测（8分） 细胞形态学观察 光镜：培养基颜色、澄清度、细胞形态 电镜：微绒毛、桥粒、细胞骨架、核等 生长与增殖特性检测 生长曲线法 细胞活力测定：MTT法 细胞分裂指数法 克隆形成率 动物细胞融合与杂交（共15分） 细胞融合的原理和方法（7分） 细胞融合：自然或人为条件下，两个或两个以上细胞相互接触，发生膜融合、胞质融合和核融合形成融合细胞的现象 方法： 病毒诱导法融合法 ①需培养大量病毒，若灭活不充分，可能感染操作者 ②融合率比较低, 可重复性不够高 化学诱导融合法 PEG诱导细胞融合的特点：①容易制备和控制，活性稳定，使用方便，融合能力强②有毒，易损伤细胞 电融合法 电融合的特点 ①融合频率高，操作简便快捷，重复性强，对细胞伤害小 ②正弦交变电场对细胞的长时间作用会损伤细胞 ③非特异性融合 B淋巴杂交瘤技术生产单抗（8分） 基本原理：正常的可产生抗体的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞在融合剂的作用下产生融合，杂交的细胞在HAT选择培养基中进行培养，得到的为杂交瘤细胞，该细胞既具有可分泌抗体的功能又可在体外大量增殖的能力单克隆抗体的大量生产 体外法：使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从上清中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液含量为10～60μg／ml，如果大量生产，费用较高。 体内法：体内接种杂交瘤细胞，制备腹水 动物干细胞（共11分） 干细胞相关概念及成体干细胞（3分） 干细胞（Stem cell）是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,能产 生表型和基因型与自己完全相同的子细胞，并具有不同分化潜能。 成体干细胞：骨髓造血干细胞HSC，间质干细胞MSC，神经干细胞NSC 胚胎干细胞的分享、培养与定向分化（8分）