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分光光度法和比色法.doc
1、几个概念:
分光光度法
在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长(λ)为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法;用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法。它们与比色法一样,都以Beer-Lambert定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区,可见光区,红外光区。
比色法
colorimetry
以可见光作光源,比较溶液颜色深浅度以测定所含有色物质浓度的方法。
以生成有色化合物的显色反应为基础,通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法,开始于19世纪30~40年代。比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件,是比色分析的关键。
常用的比色法有两种:目视比色法和光电比色法,两种方法都是以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。常用的目视比色法是标准系列法,即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中,先按分析步骤显色,配成颜色逐渐递变的标准色阶。试样溶液也在完全相同条件下显色,和标准色阶作比较,目视找出色泽最相近的那一份标准,由其中所含标准溶液的量,计算确定试样中待测组分的含量。
光电比色法是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度,将吸光度对浓度作图,绘制工作曲线,然后根据待测组分溶液的吸光度在工作曲线上查得其浓度或含量。与目视比色法相比,光电比色法消除了主观误差,提高了测量准确度,而且可以通过选择滤光片来消除干扰,从而提高了选择性。但光电比色计采用钨灯光源和滤光片,只适用于可见光谱区和只能 得到一定波长范围的复合光 , 而不是单色光束,还有其他一些局限,使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。20 世纪30~60年代,是比色法发展的旺盛时期,此后就逐渐为分光光度法所代替。
有色溶液对光线有选择性的吸收作用,不同物质由于其分子结构不同,对不同波长线的吸收能力也不同,因此,每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶液,光虽对可见光无吸收作光光度技术吸收用,但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。分光谱来鉴定物质性质及含量的技术,其理论依据是(分光光度法)主要是指利用物质特有的Lambert和Beer定律。 分光光度法是比色法的发展。比色法只限于在可见光区,分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。比色法用的单色光是来自滤光片,谱带宽度从40-120nm,精度不高,分光光度法则要求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过3-5nm,在紫外区可到1nm以下,来自棱镜或光栅,具有较高的精度。
分光光度法:也叫吸光光度法,是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法,包括比色法、可见及紫外分光光度法及红外光谱法等。
3、比色法与分光光度法的特点
比色法和分光光度法主要应用于测定试样中微量组分的含量,它们的特点是:
①灵敏度高。常用于测定试样中1-10-3%的微量组分;
②准确度较高。比色法的相对误差为5-10%,分光光
度法为2-5%;
③应用广泛。大多无机离子和许多有机化合物都可以直
接或间接地用比色法或分光光度法进行测定;
④操作简便、快速。
三、分光光度法
与光电比色法的原理相同,只是二者获得单色光的方法不同,前者使用滤光片,后者使用棱镜、光栅。因而分光度法比光电比色法的准确度和选择性好。
1、分光光度法的特点:
(1) 用分光光度法可以得到精确细致的吸收光谱曲线。选择波长,可减小对朗伯-比耳定律的偏离。分光光度计一般比较精密,分析结果的准确度高;
(2) 利用吸光度的加和性可以同时测定溶液中两种或两种以上的组分;
(3) 扩大了入射光的波长范围。
分光光度法测量条件的选择
选择最适宜的测量条件时,应注意以下几点:
、入射光波长的选择:
选择被测物质的最大吸收波长作为入射光波长。这样,灵敏度较高,偏离朗伯-比耳定律的程度减小。当有干扰物质存在时,应根据“吸收最大、干扰最小”的原则选择入射光波长。
、控制适当的吸光度范围:
一般应控制标准溶液和被测试液的吸光度在0.15-0.8范围内,可以从以下两方面来考虑:
①控制溶液的浓度;
②选择不同厚度的吸收池。
、选择适当的参比溶液
参比溶液是用来调节仪器工作零点的,若参比溶液选得不适当,则对测量读数准确度的影响较大。
①纯溶剂空白:当试液、
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