季的花药培养课件总结.ppt

月季的花药培养 花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断 ，通常扦插就可以成活。 知识回顾 单倍体育种的过程？ 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体翻倍 植株（2N） 特点：1 明显缩短育种年限 2 后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） 花的结构 一、课题背景 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 （一）被子植物的花粉发育 1 雄蕊 一、基础知识 2 花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞. 花粉发育过程 小孢子母细胞花粉母细胞 小孢子 减数分裂 有丝分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 有分丝裂 精子 1个 营养细胞 生殖细胞 4个 4个 4个 4个 4个 8个 （小孢子四分体时期 单核居中期 单核靠边期 双核期） 雌蕊 的结构 活动1：阅读“被子植物的花粉发育”，回答下列问题： 1．花粉是___倍体的_______细胞. 被子植物的花粉是在 中由 经过 分裂形成的。 2．花粉的发育要经历不同的时期： 减数 单 生殖 （ ）分裂 （ ）分裂 小孢子母细胞（2n） （ ）时期（n） 单核（ ）期（n） 双核期 （ ）细胞核（n） （ ）细胞核（n） （ ）细胞（n） （ ）细胞（n） （ ）个精子(n) 单核（ ）期（n） （ ）分裂 减数 小孢子四分体 靠边 有丝 居中 生殖 营养 花粉管 2 生殖 有丝 花药 花粉母细胞 基础知识 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似 原因：培养基中的激素种类及浓度配比 ①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎； ②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难； ③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。 （三）影响花药培养的因素 1、材料的选择： ⑴不同种类植物的诱导成功率不同。 ⑵同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。 ⑶合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。 ⑷选择最合适的花粉发育时期 花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。 ⑴诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用 2，4-D、IAA； ⑵诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA代之。 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度等对诱导成功率都有一定的影响。 2、培养基的组成： 3、其他因素： 　　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 　　答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 　　为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 1. 选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 2. 最常用的方法： 某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 三、 实验操作 （一） 材料的选取 醋酸洋红法 花蕾 无菌水清洗 吸干表面水分 0.1％的氯化汞溶液 2-4 min 无菌水清洗3-5次 70％的酒精浸泡30s 1.将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s 2.无菌水清洗 3.无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4.放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4min（也可用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 5.无菌水冲洗3~5次 （二）材料的消毒 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 （三）接种和培养 经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 对培养