DNA微条形码技术在常见家禽家畜种属鉴定中应用和其法医学意义.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要…………………………………………………………………1 英文论著摘要…………………………………………………………………4 二、英文缩略语……………………………………………………………………8 三、论文 前言…………………………………………………………………………9………………………………………………………………………… 刖吾 材料与方法……………………………………………………………………10 实验结果………………………………………………………………………16 讨论……………………………………………………………………………29 结论……………………………………………………………………………32 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………33 五、参考文献………………………………………………………………………34 六、附录 综述……………………………………………………………………………35 在学期间科研成绩……………………………………………………………44 致谢……………………………………………………………………………45 个人简介………………………………………………………………………46 ·中文论著摘要· DNA微条形码技术在常见家禽家畜种属鉴定中的 应用及其法医学意义 刖 舌 种属鉴定是法医物证鉴定的一个重要环节。核外基因组DNA的一些区域不仅 可作为种属鉴定的理想目的基因，对于毛发、骨骼、牙齿等特殊生物检材，以及 生物检材中细胞核DNA量不足而无法进行分型时，核外基因组DNA分析就成为 唯一可以利用的技术手段，并且微条形码技术短片段的优势可以有效应对法医实 践中降解检材的难题。近年来DNA条形码技术作为生物分类方法学的后起之秀已 被广泛应用。 生命DNA条形码协会对DNA条形码的定义：DNA条形码即一短段能够高 效鉴定物种的DNA标准区域。法医领域中经常会遇到腐败检材，生物检材发生降 解以后，DNA也发生断裂，无法提取出完整的条形码基因，这时微条形码技术就 又为我们提供了一条技术通路。微条形码：在一些特殊领域(如法医)中，标本的 DNA已经降解，无法提取完整长度的C01基因，提取到部分COl基因(微条形 确度最高，为97％，而5’端100bp的区域鉴别度为90％，250bp区域为95％。 从DNA条形码技术最初提出到实际应用，其发展十分迅猛。2005年在伦敦 召开了第一届全球DNA条形码会议，对DNA条形码的分类概念、实验技术的细 节分析以及资源库建立等议题进行了讨论。BOLD网站收录的DNA条形码信息总 量超过130多万条，但其中具有准确的物种信息和DNA序列信息的完整物种DNA 条形码信息仅有19163种。 我国DNA条形码技术的研究报道多见于昆虫类(医学媒介生物)、海洋生物、 鸟类和少部分爬行类、哺乳类。日常生活中常见偶蹄目、奇蹄目和食肉目等哺乳 类动物研究较少。因此，本研究拟采用DNA条形码技术，研究我国常见家禽家畜 的DNA条形码数据，进一步丰富生物DNA条形码数据库信息，为司法鉴定应用 及其他领域的研究提供必须的基础数据。建立更加简便、快速、准确的基于DNA 条形码技术的种属鉴定方法，为解决司法鉴定中腐败、降解生物检材的种属鉴定 提供简单有效的科学手段。 材料和方法 l、样本来源 常见家禽：鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子血液样本； 常见家畜：水牛、黄牛、山羊、绵羊、猪、马、驴肌肉组织， 犬(阿拉斯加犬、金毛猎犬、比熊犬、泰迪犬、西施犬)血液； 人血液样本。以上样本各五例，其中除水牛样本采自广西宜宾地区外其余 均采自沈阳地区。人血液样本由中国医科大学法医血清教研室提供。 2、样本处理 别加以处理1、3、6、9、12、15次以制备降解检材。 3、实验方法 采用有机溶剂法提取基因组DNA，紫外分光光度法检测DNA含量。自行筛 选引物扩增人基因组C01序列，应用共同区PCR和测序技术分析的C01的种属 差异。自行筛选引物扩增动物基因组种属特异性C01序列，聚丙烯酰胺凝胶电