GFP在大肠杆菌中的诱导表达和检测概述.pptVIP

实验八：GFP在大肠杆菌中的诱导表达和检测 XIAMEN UNIVERSITY 宋 刚 2188275 gangsongsd@ 厦门大学抗癌研究中心 一．实验目的 掌握外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。 复习SDS的制备及其分离原理。 二．原核表达的一般流程 获得目的基因 → → 准备表达载体 → → 将目的基因插入表达载体中（测序验证） → → 转化表达宿主菌 → → 诱导靶蛋白的表达 → → 表达蛋白的分析→ →扩增、纯化、进一步检测 原核表达：将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点： ——易于生长和控制； ——用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵； ——有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。 ——但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。 三．实验原理 表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以下几种元件： ——选择标志的编码序列； ——可控转录的启动子； ——转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)； ——一个多限