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Chapter4 微生物的生长繁殖与遗传变异 第一节 微生物的生长 生长：微生物在适宜的环境条件下，不断吸收营养物质、按照自己的特点代谢。 如果同化超过异化作用则表现为原生质增加，体积增大，细胞生长。 繁殖：任何微生物细胞生长增大是有限度的，生长到一定阶段，发生分裂。对于单细胞生物来说，分裂表现为个体数目增多，则是繁殖；对多细胞微生物，如果细胞增多而个体数不增多则仍是生长，只有增加个体数目才是繁殖。 一般讲，生长是指个体的生长，包括繁殖。 微生物从生长到繁殖的过程称为发育。 一、细菌的生长曲线： 一般来说，细菌的生长速度随着时间和环境的改变而迅速改变，在适宜的条件下，细菌大量繁殖，使营养物质迅速消耗，而代谢产物、排泄物等有毒物质增加、或PH通气等条件改变、生长速度则随之下降，然后大量死亡。 当少量的单细胞微生物（细菌）不能培养接种于新鲜的培养基中进行培养时，由于每一个体所处的环境条件相同，都能充分迅速的生长繁殖、在培养条件不变的情况下，定时取样计算细胞数目，以时间为横坐标，以菌数对数为纵坐标制成曲线，称为细菌的生长曲线。从这以曲线可以看出明显分为几个时期。 延迟期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期 （一）、延迟期 当细菌被转入一新鲜的液体培养基中后并不立即繁殖，而是需要一段时间来适应新的环境，最初菌数并不增加或减少，但它们仍然正常吸收营养物质，细胞体积随之增大，原生质变得均匀，贮藏物质逐渐消失，然后开始繁殖，由慢到快。 延迟期在初期阶段细胞对外界环境不敏感，但处于延迟期后期阶段，则极为敏感，如对高温、低温、高浓度盐溶液等都是如此。这是因为接种新环境的细胞经短暂的适应后要合成大量的核酸蛋白质等以备迅速繁殖之用的结果。 应用：诱变育种 延迟期的长短受很多因素限制：1.细菌种类；2.接种量；3.前后培养基成分；4.培养条件。 （二）对数生长期： 延迟期末，细菌细胞开始分裂，基质中细胞迅速增加，进入对数生长期。在这一时期，细菌细胞数量呈几何级数增加。细胞生长旺盛、细胞数量的增加与原生质量的增加及菌液混浊度的增加呈正相关。如果以时间为横坐标，以菌数为纵坐标作图，得一直线。 因为细胞为一分为二的繁殖，所以菌体的增加也呈几何倍数。即：1，21，22，23，24……2n。 这里指数n表示细菌分裂的次数，单个细胞完成一次分裂所需的时间称为世代时间（G） 各种不同的细菌在不同的条件下的世代时间是不同的。但一种细菌在同一条件下则世代时间相对稳定，如果在一定时间t内细菌共繁殖了n次，则世代时间G表示为： 因此： 或t＝nG 如果在一对数生长阶段现测得细胞数为B，t时间后又测得细胞数为b 则有：b＝B?2n 取对数得：lgb=lgB+nlg2 得：n=lgb-lbB/lg2 ∴.n=3.3lgb/B ∵G＝t/n ∴ 例：某细菌培养体第一次测得菌数104/ml，4小时后又测得菌数为108/ml，求此菌的世代时间及在此世代时间内的繁殖代数。 解：因世代时间 T＝4小时＝240分钟，b＝108/ml，B＝104/ml ∴ ＝ ＝18.2分钟 又：n＝t/G G＝18.2 ∴n＝240/18.2＝13.2代 一般细菌细胞世代时间为20～30分钟，有些短，有些长。 由于这一时间代谢旺盛，生长速率快，菌体中细胞形态化学组成生理特征较为一致，在微生物生产中常用这一时期的细胞作为种子，试验及研究这也常以这一时期细胞做材料。 （三）、最高稳定生长期： 在一定体积的培养基中，由于营养的限制，细胞不可能按对数期无限生长，当大量繁殖后，营养被消耗及各种不良环境开始出现，因此细胞的死亡速率开始增加，繁殖速度开始下降，当繁殖与死亡速率相等时，细胞总数不再增加，培养液中单位体积的菌数达到最大值，并维持一定时间，这一时期就是最高稳定生长阶段。这时培养基中的菌数为这一条件下所能养活的细菌的最高数额。 特点：1、分裂速度降低；2、细胞内贮存物质大量积累；3、出现颗粒异集粒、脂肪粒等；4、芽孢细菌在这一阶段形成芽孢5、细胞呈现衰亡。 （四）、衰亡期 最高稳定期后，由于营养物质缺乏、代谢产物及有毒物质大量积累，造成不良环境条件，细胞生长速率被限制，死亡速率迅速上升，这时时间与菌数的对数成反比。即：菌数呈几何级数下降。 特点：1、菌体出现多形态；2、生长曲线急剧下降；3、菌体颗粒更明显；4、原生质中出现液泡；5、细胞常常自溶消亡。 但这一时期少数细菌仍可存活相当常的时间，细胞处于休眠状态。 应用： 1、延迟期灭菌，选育优良品种（因为遗传保守性差，易发生变异