辅助降血糖功能评价方法分解.doc

附件3： 辅助降血糖功能评价方法 试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 分为方案一（胰岛损伤高血糖模型）和方案二（胰岛素抵抗糖\脂代谢紊乱模型）两种 1.1.1 方案一（胰岛损伤高血糖模型） 1.1.1.1 体重 1.1.1.2 空腹血糖 1.1.1.3 糖耐量 1.1.2 方案二（胰岛素抵抗糖\脂代谢紊乱模型） 1.1.2.1 体重 1.1.2.2 空腹血糖 1.1.2.3 糖耐量 1.1.2.4 胰岛素 1.1.2.5 总胆固醇 1.1.2.6 甘油三酯 1.2 人体试食试验 1.2.1 空腹血糖 1.2.2 餐后2小时血糖 1.2.3 糖化血红蛋白（HbA1c）或糖化血清蛋白 1.2.4 总胆固醇 1.2.5 甘油三酯 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。 2.2 根据受试样品作用原理不同，方案一和方案二动物模型任选其一进行动物实验。 2.3 除对高血糖模型动物进行所列指标的检测外，应进行受试样品对正常动物空腹血糖影响的观察。 2.4 人体试食试验应在临床治疗的基础上进行。 2.5 应对临床症状和体征进行观察。 2.6 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验： 方案一：空腹血糖和糖耐量二项指标中一项指标阳性，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品辅助降血糖功能动物实验结果阳性。 方案二：空腹血糖和糖耐量二项指标中一项指标阳性，血脂（总胆固醇、甘油三酯）无明显升高，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品辅助降血糖功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验：空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白（或糖化血清蛋白）、血脂四项指标均无明显升高，且空腹血糖、餐后2小时血糖两项指标中一项指标阳性，对机体健康无影响，可判定该受试样品具有辅助降血糖功能的作用。 辅助降血糖功能检验方法 Method for the Assessment of Assisting Blood Sugar Reduction Function 1.动物实验 1.1实验动物 选用成年动物，选用小鼠（262g）或大鼠（18020g），单一性别，大鼠每组8－12只、小鼠每组10－15只。 1.2材料 1.2.1试剂 四氧嘧啶（） 1.2.2 高热能饲料 猪油10% 、蔗糖15% 、蛋黄粉15% 、酪蛋白5% 、胆固醇1.2% 、胆酸钠0.2% 、碳酸氢钙0.6%、石粉0.4%、鼠维持料52.6% 1.2.3仪器 血糖仪、全自动生化仪、可见光分光光度计、酶标仪、天平。 1.3剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个模型对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设空白对照组。同时设给予受试样品高剂量的正常动物组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.4实验方法 1.4.1 正常动物降糖实验 选健康成年动物按禁食3－5小时的血糖水平分组，随机选1个对照组和1个剂量组。对照组给予溶剂，剂量组给予高剂量浓度受试样品，连续30天，测空腹血糖值（） 1.4.2 高血糖模型降糖实验 方案一 1.4.2.1胰岛损伤高血糖模型 1.4.2.1.1原理 四氧嘧啶（）细胞毒剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛细胞，造成胰岛素分泌低下，引起实验性糖尿病。 1.4.2.1.2造模方法 购入成年动物，适应1天后，随机取15只动物禁食3－5小时，测空腹血糖，作为该批次动物基础血糖值。随后动物禁食24小时（自由饮水），注射四氧嘧啶（用前新鲜配制）造模，小鼠45－50mg/kg BW.iv静脉注射或125－130mg/kg BW.ip腹腔注射，大鼠50－80mg/kg BW.iv或120－160mg/kg BW.ip。5－7天后动物禁食3－5小时，测血糖，血糖值10－25mmol/L为高血糖模型成功动物。BW—body weigh 体重 1.4.2.1.3高血糖模型动物降糖实验 选高血糖模型动物按禁食3－5小时的血糖水平分组，随机选1个模型对照组和3个剂量组（1.1mmol/L）30天，测空腹血糖值（）1.4.2.1.4高血糖模型动物糖耐量实验 剂量分组及受试样品给予时间同1.4.2。各组动物禁食3－5小时，测定给葡萄糖或医用淀粉前（即0小时）血糖值，剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，1520分钟后各组经口给予葡萄糖2.0g/kg BW或医用淀粉3－5g/kg BW，测定给葡萄糖后各组0.5、2小时的血糖值或给医用淀粉后1、2小时的血糖值，观察模型对照组与受试