1101重组质粒综述.ppt

* * 第二章 实验 1（第一节） 重组质粒 目 的 1．放大某一基因片段，用于探针、基因功能检测、报道基因研究等。方法是：把某一DNA片段插入到相应的载体（比如质粒、噬菌体、哺乳类细胞表达载体等），给予扩增，用以标记探针、测序、cDNA库建立、基因功能检测等多种分子生物学实验。因此重组质粒就成为中医药实验研究中最为常规的实验。 通常，扩增目的DNA主要借助两类方法，即PCR技术和载体重组技术，鉴于PCR技术受到酶的性能和方法学等多方面的限制，某些DNA和超过一定长度DNA的扩增会有困难，所以载体重组技术倍受青睐。 2．DD-PCR产物的克隆和测序。 3．RACE-PCR产物的克隆和测序。 4．构建基因库、cDNA库，等。 5．纯化基因片段。 关于载体——质粒 质粒是一类双链、闭环的DNA分子，存在于细菌体中，独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。通过改造，实验室常用质粒被赋予了以下几种特性： 1．含有多克隆位点区域，可方便地插入目的DNA片段。 2．对细菌的可转移性，即在实验中，可将质粒诱导入细菌。 3．选择标记。常用的有抗生素抗性基因。这样，一旦质粒进入细菌，便可使该细菌对相应的抗生素产生抵抗能力，在含这一抗生素的琼脂平板上传代。 4．在细菌体内可获