细胞培养基本方法(复苏换液传代冻存)详细分析.pptVIP

细胞培养 一 原代培养（略） 二. 传 代 培 养 准备及注意事项 换 液 传 代 冻 存 复 苏 MTT 准备事项 紫外灯照射细胞室30分钟,风机运行10分钟后方可进入实验室. 穿专用的口罩,帽子,拖鞋,工作衣等. 带手套,并用酒精擦拭之. 准备好实验必需用品. 超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面. 超净工作台内操作完成后， 要用酒精棉球擦拭台面,除了酒精灯,镊子,试管架等物品外,其他都要拿出工作台外. 紫外灯照射30分钟. 换液 把细胞培养瓶从培养箱中拿出, 拧紧盖子; 观察瓶内培养基的颜色, 是否浑浊等; 放在倒置显微镜下观察细胞生长状况。 放入超净工作台内,点燃酒精灯,拿培养瓶口在酒精灯火焰上转两圈以上,至少三秒. 取下盖子,烧瓶口;倒掉培养基,烧瓶口; 拿出PBS液瓶子,烧瓶口和镊子;用镊子将塞子取出,烧瓶口（至少10圈）。 6.用吸管吸取3ml的PBS，打入培养瓶内。烧培养瓶口， 来回晃动PBS100次后到掉PBS。重复此操作一次。 7.拿出培养基瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出， 烧瓶口（至少10圈）。 8.用吸管吸取5ml-8ml的培养基打入培养瓶内，烧瓶口， 镊子和盖子； 9.盖上盖子，倒置显微镜下观察，之后标明名称和日期， 酒精棉球擦瓶口和瓶身，放入培养箱内即可。 注意： 1.打开培养