23细胞融合与单克隆抗体资料.pptVIP

单克隆抗体的两次筛选剂 以及原因 第一次筛选的原理与方法：第一次筛选是杂交瘤细胞的选择性培养。采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）,其依据是细胞中的DNA合成有两条途径(D途径和S途径），在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。 第二次筛选的原理和方法:通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养. 两个细胞正在融合 受精作用 知识点一 动物细胞融合 1．概念：是指在一定的条件下将 动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2．诱导动物细胞融合的方法： （1） （ 如 振动、离心、电刺激 ） （2） （ 如 聚乙二醇 ） （3） （ 如 灭活的病毒 ） 3.细胞融合的原理是 。 4。动物细胞融合技术的最重要的用途之一是 。 思考：动物细胞融合和植物体细胞杂交的区别？ 化学法 生物法 物理法 2个或多个 单克隆抗体的制备 细胞膜的流动性、细胞增殖 探究：动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别？ 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 诱导方法 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 用途 获得杂种植株 制备单克隆抗体 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 即：既保留了诱导细胞融合的能力，又不会感染细胞。 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌—鸡 原生质体—血红细胞 1975年 人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年 人—小鼠 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年 单克隆抗体 Monoclonal Antibody 单克隆抗体(McAb) 1975年英国科学家Milstein和Kohler将产生抗体 的淋巴细胞同肿瘤细胞融合，成功建立了单克隆抗 体技术，而获得1984年诺贝尔医学和生理学奖。 每个B淋巴细胞仅专一地产生、分泌一种针对某 种抗原决定簇的特异性抗体，而肿瘤细胞可以无限 增殖，因此杂交瘤细胞可在体外培养或移植到体内 条件下分泌大量结构与特性相同的高纯度抗体。 单克隆抗体技术的最主要优点是可以用不纯的抗 原分子大量制备纯一的单克隆抗体。 单抗的特点 高度均质性-------始于一个B细胞的单克隆系,均质 高度特异性-------针对单个抗原决定簇反应,一般无交叉反应 来源稳定,产量大 知识点二 单克隆抗体的制备 探究1：传统方法获得的抗体有何缺点？产生抗体的细胞是什么？有何特点？ 补充材料1：由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。所以单克隆抗体的优点________________________________。 探究2：阅读教材P58页单克隆抗体制备过程的文字箭