第五章重组DNA技术讲课.ppt

* 第五章 重组DNA技术 以LNX1基因的表达载体构建进行说明 第 一 节 重组DNA技术的主要工具 一 限制性核酸内切酶 定义 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ 分类 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ （基因工程技术中常用Ⅱ型） Ⅱ类酶识别序列特点—— 回文结构(palindrome) 切口 ：平端切口、粘端切口 GGATCC CCTAGG Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 重组DNA技术中常用的工具酶 切除末端磷酸基 碱性磷酸酶 在3′羟基末端进行同质多聚物加尾 末端转移酶 催化多聚核苷酸5′羟基末端磷酸化，或标记探针 多聚核苷酸激酶 合成cDNA 替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 反转录酶 又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的5??3?聚合、3??5?外切活性，而无5??3?外切活性。常用于cDNA第二链合成，双链DNA 3?末端标记等 Klenow片段 合成双链cD