第7章微生物遗传变异和育种03论述.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * （一）有性杂交(sexual hybridization) 一般指性细胞间的接合和随之发生的染色体重组，并产生新遗传型后代的过程。 凡是能产生有性孢子的酵母菌或霉菌，原则上都能采用与高等动、植物杂交育种相似的有性杂交方法进行育种。 （二）准性杂交(parasexual hybridization) 同种而不同菌株的体细胞间发生的融合，不经过减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。常见于半知菌类(有丝分裂真菌，Mitosporic Fungi )。 [Aspergillus nidulans (Anamorph) → Emericella nidulans 构巢裸胞壳(Teleomorph )]。 准性杂交过程： ①菌丝联结(anastomosis)； ②形成异核体(heterocaryon)； ③核融合(nuclear fusion)； ④体细胞交换(somatic crossing-over)和单元 (倍)化。 异核体：同一菌丝有不同遗传性状的核在同一 细胞质中生长。 同核体：同一菌丝中只有一种核。 异核体的特点： 1）具有感受性的两种菌丝间才可形成异核体； 2）具有野生型性状，可在基本培养基上生长 ；（基因互补功能） 3）大多数同核体的分生孢子不能在基本培养基上生长；如能生长，则为异核体、或为杂合二倍体（重组子）。 异核体 体细胞交换和单倍化： 杂合体细胞中有极少数细胞核在进行有丝分裂的过程中，能发生体细胞染色体间的交换、分离（单倍体化）而产生具有新性状的单倍体杂合子、双倍体及非整倍体。 【目的要求】 1.了解基因工程的基本过程和基本技术。 2.了解微生物学在基因工程技术的建立与发展中的重要意义。 第四节 微生物与基因工程 【主要内容】 1.基因工程的基本过程 2.微生物学与基因工程的关系 —— 是指把分离到的或合成的外源基因经过改造，插入到载体中，导入宿主细胞内，使其扩增和表达，从而获得大量的基因产物，或者使生物表现出新的性状。又称重组DNA技术。 基因工程（gene engineering） 基因工程的基本操作 克隆载体或表达载体 供体DNA 连接 酶切 酶切 重组载体 宿主细胞 转化 重组体克隆 （工程菌） 扩增、筛选 微生物（学）在遗传工程中的重要性 ①载体：微生物本身（病毒和噬菌体） 或微生物细胞中的质粒 ②工具酶：提供各种特异工具酶 ③受体：尤其是E. coli、Bacillus subtilis和Saccharomyces cerevisiae 3种常见微生物 ④微生物工程(或发酵工程)：实现外源基因产物的表达生产 ⑤优良基因的供体基因库：常用的独特的基因供体，而且整个微生物界将是一个最为富饶的供体基因库。 ⑥理论研究：基因结构、性质和表达相关理论的研究对象。 【思考题】 1.原核微生物有哪些基因重组形式？ 2.真核微生物有哪些基因重组方式？ 3. 什么是基因工程？有哪些基本操作步骤？ 4. 基因工程与微生物的关系如何? * * * * * * * * 转化过程：以S. Pneumonia为例分为六阶段： 1★双链DNA片段与感受态受体菌细胞表面的特定位点（主要在新形成细胞壁的赤道区）结合； 2★在吸附位点上的DNA被核酸内切酶分解，形成平均分子量为4~5×106的DNA片段； 3★DNA双链中的一条单链被膜上的另一种核酸酶切除，另一条单链逐步进入细胞，这是一个耗能的过程。分子量小于5×105的DNA片段不能进入细胞。 4★来自供体菌的单链DNA片段在细胞内与受体细胞核染色体组上的同源区配对交换，形成了一个杂合DNA区段（heterozygous region）。在这一过程中，有核酸酶、DNA聚合酶和DNA连接酶的参与； 5★受体菌的染色体组进行复制，杂合区段分离成两个，其中之一获得了供体菌的转化基因，另一个未获供体基因； 6★当细胞发生分裂后，一个子细胞含供体基因，这就是转化子；另一个细胞与原始受体菌一样。 * * * * * * * * * * * * * 研究方法：1946年J. Lederberg等采用E. coli的两株营养缺陷型进行实验，奠定了方法学基础；也为以后的微生物遗传学提供了必要的条件。 存在范围： 细菌：G– 较为多见如E.coli、Salmonella、Shigella、Serratia、Vibrio 、Azotobacter 、Klebsiella和Pseudomonas等最为常见 放线菌：Streptomyces 、Nocardia 接合还可发生在不同属的菌种之间，如E. coli与Salmonella typhimurium之间或S. typhimuriu