大肠杆菌,枯草杆菌地衣芽孢杆菌以及酵母的感受态制备及转化.docVIP

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化 地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化条件探索及优化见文献。 接种新鲜Bacillus licheniformis 2709单菌落至10mL芽孢杆菌基本培养基中，37 剧烈振荡培养16~18 h，250 r/min，培养至OD600为1.0时，取1.5 mL该培养液加入到10 mL 37 水浴预热的40 mL新鲜芽孢杆菌基本培养基中。37剧烈振荡培养4 h，250 r/min。加入 10 mL芽孢杆菌饥饿培养基，37剧烈振荡培养4 h，250 r/min。将细菌在冰水浴冷却15 min，分装于0.5 mL Eppendorf 管中，于4 10000 r/min 离心10 min ，沉淀用预冷的水轻轻溶解悬浮，可直接进行实验，也可于-70冻存。 将新鲜制备的转化前细胞0.5 mL在4 10000r/min下离心10 min，弃上清，加入0.5 mL 冰水悬浮，如此反复洗涤细胞三次，轻柔操作，冰浴10 min分别加入不同浓度的质粒DNA，混匀，将溶液转移到预冷的无菌电转化池中，吸干池表面的水分，将电转化池放入电转仪的样品槽中，在电场强度为25μF、不同的电压下电击转化。迅速取出电转化池，加入1 mL BY液体培养基稀释细胞，37 水浴摇床培养1.5 h，取200 μl涂布于LB固体卡那霉素抗性平板上，37 培养。 阳性转化子的筛