Westernblot实验步骤论述.ppt

Western blot（免疫印迹） Western blot是20世纪70年代末和80年代初，在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的一种广泛应用于蛋白质检测的分子生物学技术。它是将蛋白质凝胶电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质检测技术。与Southern、Northern杂交方法类似，但Western Blot被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，它具有直观、特异、灵敏（pg)的优点，且可进行蛋白质的定性及半定量分析。  Western blot实验原理： 蛋白质混合样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳使蛋白质按分子大小分离，将分离的各蛋白质条带（其中含有能与特异性抗体相应的待检测的蛋白即抗原蛋白）原位转移到固相载体膜上（蛋白条带转移到NC、PVDF膜上此过程称为blotting ），用无关蛋白质封闭液（如BSA）封闭膜的非特异性位点（膜上没有蛋白转移上去的位点），加入特异性抗体（即一抗，是抗目的蛋白的抗体）后印迹上的目的蛋白（抗原）与一抗发生特异性的免疫结合反应，洗涤后再加入能与一抗发生免疫结合反应的酶标记二抗(二抗即抗抗体，是以一抗为抗原免疫动物产生的抗体)，最后通过二抗上标记酶的性质进行检测，即根据底物显色的颜色有无及深浅（或发光有无及发光强弱）来探测膜上印迹蛋白抗原的存在与否及含量多少。 Western blot 实验步骤 1.蛋白样品的制