2发酵液预处理.ppt

B. 酸碱调节，使蛋白质与离子形成沉淀 在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子形成沉淀，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐等； 在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子形成沉淀，如Cu2+、Zn2+、Fe3+ ,Ag+、等。 2) 变性 Denaturation 蛋白质从有规则的排列变成不规则结构的过程称为变性。变性蛋白质溶解度较小。 加热， 大幅度调节pH值， 加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等。 不足之处： 加热法只适合于对热较稳定的目的产物； 极端pH值也会导致某些目的产物失活，且要消耗大量酸碱； 有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。 链霉素生产中，采用调pH至酸性（pH3.0），加热至70℃，维持半个小时的方法来使蛋白变性，能使过滤速度增大10-100倍，滤液粘度可降低1/6。 柠檬酸发酵液，采用加热至80℃以上，使蛋白质变性凝固和降低发酵液粘度，从而大大提高了过滤速度。 蛋白质变性例子: 3) 吸附法 adsorption 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 四环类抗生素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成胶状沉淀来吸附蛋白质，利用此法除蛋白质已取得很好的效。 在枯草杆菌发酵液中，常加入氯化钙和磷酸氢二钠，这两者本身生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其它不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，从而加快了过滤速度。 2.2 菌体的回收 2.2.1 影响发酵液菌体回收的因素 1.发酵液中悬浮粒子的大小形状 2.发酵液的黏度viscosity ： 固液分离速度通常与粘度成反比，粘度越大，菌体回收越困难。影响粘度的因素： 菌体的种类和浓度（重要因素），通常丝状菌、动物或植物细胞悬浮液粘度较大; 浓度增大，粘度也提高。 培养液中蛋白质、核酸大量存在：通常细胞破碎或粘度增大。因此细胞破碎的程度应控制，时间要适宜。 培养基成分：如用黄豆粉、花生粉作氮源，淀粉作碳源，粘度都会升高。 此外，某些染菌发酵液，如染细菌，则粘度会增大。 发酵过程的不正常处理，如大量过剩的培养基和消沫油加入，都会使粘度增大。 2.2.2 常见的菌体回收方法 膜分离 membrane separation 离心 Centrifugation（第5章） 过滤 filtration * 膜分离技术 概念：用半透膜作为选择障碍层，利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推动力，允许某些组分透过而保留混合物中其它组分，从而达到分离目的的技术。 * 常见膜分离方法 按分离粒子大小分类： 透析（Dialysis，DS） 微滤（Microfiltration，MF） 超滤（Ultrafiltration，UF） 纳滤（Nanofiltration，NF） 反渗透（Reverse osmosis，RO） 电渗析（Electrodialysis，ED） 渗透气化（Pervaporation，PV） * 截留分子量： 微滤 0.02～10μm 透析 3000 Dalton～ 几万Dalton 超滤 50ｎｍ～10０ｎｍ或5000～50万Dalton 纳滤 200～1000Dalton或1nm 反渗透 200Dalton * um A RELATIVE SIZE OF COMMON MATERIAL 过滤对象 MOLECULAR WEIGHT 分子量 0.001 10 0.01 100 0.1 1000 1.0 10 4 10 10 5 100 1000 10 6 10 7 100 200 5,000 20,000 150,000 500,000 Aqueous salts 中水盐份 Metal ions 金属离子 Sugars 蔗糖 FILTRATION TECHNO- LOGY 过滤方法 Pyrogens 热源 Virus 病毒 Colloidal silica 胶体硅 Albumin protein 白蛋白 Bacteria 细菌 Carbon black 碳黑 Paint pigment 颜料色素 Yeast cells 酵母 Milled flour 面粉 Beach sand 海滩沙砾 Pollens 花粉 RO 反渗透 Ultrafiltration 超滤 Microfiltration 微滤 Particle filtration 一般过滤 THE FILTRATION SPECTRUM 过滤谱图 NF 纳滤 2.2.3 过 滤 filtration 定义：过滤就是将悬浮在发酵液中的固体颗粒与液体进行分离的过程。 过滤系统: 过滤介质filter medium :过滤采用的多孔物质； 滤浆filter pulp :所处理的悬浮液； 滤液filtrate :通过多孔通道的液体； 滤饼或滤渣filter cake:被