培养基的制备总结.pptVIP

第二讲 植物组织培养基的制备 第一节 培养基的组成 培养基种类比较多 共同之处：含有植物生长发育所必须的营养物质和生物活性物质(激素） 不同之处：配制培养基的化学试剂、培养基成分的浓度与比例不同 二、无机营养 不同培养基的无机盐（特别是大量元素）的浓度差异很大。 三、 有机营养 有机营养=有机成分：维生素和氨基酸的总称。 常用：肌醇、烟酸、维生素B6、维生素B1和甘氨酸等。 其它的维生素：维生素M（叶酸）、维生素B2（核黄素）、泛酸钙等。 其它氨基酸：谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺等 难培养的材料，可增加有机成分的种类。 四、碳源 最常用的糖是蔗糖(sucrose)，但也有用葡萄糖(glucose)、果糖(fructose)或其它的糖，有时几种糖混用。 糖是营养物质，但不是越多越好。培养基中糖的用量大多在10-60g/L，一般为20-30 g/L。 五、 植物生长物质=植物激素 植物生长物质是植物激素和植物生长调节剂的总称。 植物激素：植物合成的、微量就有显著效应的物质。 植物生长调节剂：人工合成的、具有植物激素相似作用的物质。 1.生长素(Auxins) α-Naphthalaene acetic acid (NAA) 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) 生长素的在组织培养中的主要作用： (1) 促进细胞分裂、增殖，形成愈伤组织； 2,4-DNAAIAA, IBA (2) 控制器官的分化，诱导根的形成、抑制芽的诱导。 诱导根的作用：IBANAAIAA Zeatin 玉米素 (ZT) （遇高温不稳定） 6-benzylaminopurine6-苄基氨基嘌呤（6-BA, BA, BAP） Kinetin 激动素 （KT） Thidiazuron (TDZ；噻苯隆 ): 棉花脱叶剂；后发现具有强烈的细胞分裂素的作用，比BA的效果高几十-几百倍。 细胞分裂素在植物组织培养中的主要作用： 1. 促进细胞分裂、增殖，形成愈伤组织； 2.控制器官的分化，诱导芽的形成和增殖、抑制根的诱导。 细胞分裂素/生长素的比值： 高：形成芽； 低：形成根； 相当：愈伤组织增殖，但不分化 =植物器官分化的激素调控模式 ——具有普遍性：在很多植物上得到证明 ——是进行植物组织培养技术研究最重要的指导思想。 3、赤霉素 （Gibberellins） 赤霉素种类很多，有七、八十种，其中以赤霉酸3（Gibberellic acid,GA3）用得最普遍。 赤霉素的生理作用 赤霉素最显著的作用是促进细胞的伸长，也有打破种子休眠的作用。在植物组织培养中使用赤霉素主要用于促进芽或茎的伸长。 赤霉素对热不稳定，故不能用高温法消毒。 4、乙烯 CH2=CH2 乙烯促进果实成熟，加速植物衰老。植物组织培养极少使用乙烯（乙烯利），相反，而是尽量控制乙烯的产生。 5、脱落酸（Abscisic acid） ABA 促进植物的衰老，植物组织培养很少用。 在胚状体（embryoid）的诱导和培养中常常使用脱落酸，促进胚状体的成熟。 七、有机附加物 （Organic additives） 水解酪蛋白、水解乳蛋白、蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物：用量为0.1-10g/L，一般为0.5-3 g/L。 椰子汁：100-200ml/L。 这些物质的成分复杂、不明确，统称为有机附加物。当材料生长不好时，加入这些物质往往可以会明显改善材料的生长状况。 八、其它物质 防止与减缓植物材料褐化的物质： 1）抗氧化剂：抗坏血酸（Vc）、L-半光氨酸、柠檬酸、二硫苏糖醇等。 2）吸附剂：活性炭（无选择性）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP；酚类物质吸附剂）。 蝴蝶兰叶片的褐化 第二节 培养基的制备 为了便于培养基的配制，实际操作过程中可以先将常用的成分配成一定浓度的母液（stock solution），然后在配各种试验培养基时取一定量的母液稀释。 可以配成母液的是无机盐、有机成分和植物激素等。 1、无机盐母液的配制（以MS培养基为例） 1）大量元素母液的配制： 大量元素浓度比较高，故母液浓度(倍数)不能过大，否则溶解不完全，容易析出(特别是冬天)，使用很不方便，一般为20、50或100倍。 另一个要考虑的问题是高浓度时有些离子之间发生会发生相互作用，形成沉淀，如SO42-、PO43-和Ca2+之间。因此，在母液浓度较高时，Ca盐要与硫酸盐、磷酸盐分开。 因此，母液浓度高时MgSO4和CaCl2要分开。如把KNO3和CaCl2·2