精确的机械感应装置在基底硬度对细胞牵引力影响的研究(翻译)资料.docVIP

精确的机械感应装置在基底硬度对细胞牵引力影响的研究 Léa Trichet, Jimmy Le Digabel, Rhoda J. Hawkins, Sri Ram Krishna Vedula , Mukund Gupta, Claire Ribrault,Pascal Hersen, Rapha?l Voituriez, and Beno?t Ladoux 细胞迁移在许多基本的生物学的研究中，如细胞生长形态、肿瘤转移和伤口愈合粘着斑粘着斑基于主动凝胶理论的唯象模型 细胞迁移不仅与细胞培养环境中的化学物质有关，还有其机械性能，细胞通过拉动基底直接感应基底的物理特性及其环境。大量资料表明弹性阵列在调节细胞功能有关键性的作用，例如影响细胞粘附性、迁移和分化。这是通过细胞与基底产生肌动球蛋白的力量来感应基底硬度。细胞粘附的机械敏感性质决定了细胞外基质（ECM）影响机械性能的灵敏度。通过粘着斑（FAs）的测量来测量受到的牵引力。文献中报道，FAs的面积和它的动力有一定的相关性。机械敏感性是通过受力后来诱发FAs的触发，研究其中的关系，也可以反过来分析。但是对于细胞的机械敏感性如何感应它的基底硬度换（还）FSA）和REF52成纤维细胞的荧光显微镜表达荧光标记的FA蛋白（YFP-桩蛋白）（图1 A和B）。接种REF52细胞稳定表达YFP-桩蛋白在μFSA包括各种直径和高度的纤连蛋白涂覆的微柱。这些不同形状的微柱导致基底有不同的弹簧系数（K从3到80，图1 C），而不改变其分子表面尺度特性。 当细胞在基底上贴壁生长5h后，细胞产生的牵引对微柱造成偏转（图1 B）。本文同时分析了牵引力和FAs块随时间的动态变化。作为对照实验，我们比较了细胞在平坦的聚二甲基硅氧烷（PDMS）表面的实验（图S1）。正如从以前的研究预期的那样，这些分布是偏向基材硬度较大的值。 直径2微米的微柱基底FA的大小没有影响，所以在FAS和平板PDMS基板（图S1）的分布相似。 图1通过表达YFP-桩蛋白在微柱基底REF52成纤维细胞的附着力和牵引力。（一）微柱基底的典型REF52细胞扫描电子显微照片（比例尺，15）（B）单细胞在微柱基底的变形（K为34）。 微柱阵列（红色）用Cy3纤维蛋白标记，YFP-桩蛋白是绿色。 （比例尺，15（C）连续的记录B图中 FASDE 生长和微柱位移变化图像。（比例尺，10微米）（D）显示FA上的PDMS微柱的顶部形成示意图 。（E）力（蓝色）以时间为横轴（在基板K为 34）的函数。 分析得出在细胞边缘的牵引力和FA是最大的。在大多数情况下，牵引力和FA随着时间的推移有紧密的联系（图1D和E）：力和FA都随着时间相同的增加（如基底K为34的一个基板上的例子，图1E）。我们设计了一个硬度梯度（4~80）来验证硬度对FAs的影响。对于每个时间点，我们在不同细胞的FA的 边缘取平均力F（N5）。平均牵引力（Fk），在蛋白位点施加，增长更迅速，具有较高的硬度（图2A）的硬度达到了较高的饱和度。 和牵引力相比，FA面积的增长就不太明显（图2B）。此外，由图2C可知，在硬度范围内，饱和压力Fp 正比于基底刚度。这一结果表明，饱和力对应大约0.840.03微米的基板变形恒定，与之前的其它类型细胞研究一致。有趣的是，力随时间增加的初始速率，dF/dt，还与基板的硬度呈线性变化，使微柱位移等于1.3 nm / s时与硬度无关。总之，这些数据表明的，是由基底的变形调节来验证机械敏感机制的存在。 图2，牵引力和粘着动态曲线。（A）平均牵引力与时间在不同基底硬度的函数。细胞数目N5和支柱数目N15。每条曲线前面呈现出快速增长，最后力达到最大。（B）FA面积与时间在不同基底硬度的函数。（C）饱和力和基底硬度的函数。（D）牵引力的的变化率和基底硬度的曲线图 粘着斑面积，牵引力，和压力之间的关系。 为了进一步了解牵引力的性质，我们研究作为横轴的基底硬度的函数的力和粘着区面积之间的关系。研究牵引力和FA面积在不同时间点的关系，绘图3A，对于基底硬度从4至80（每个点代表一个平均值大致等于至少15的FA区域）。这个刚度范围从不同的微柱基底对应于一个等效的杨氏模量（2.8至60kPa）。在给定的基底硬度上牵引力和FA区域之间得到一个线性关系。但是对于不同的基底硬度有事结果就不同。用不同力值可以得到同样的FA面积。例如，从3变化到42 刚度范围和从4.7到80（图3A）内的力，获得了相同的面积。事实的FA相似的区域可以对应不同的牵引力，如图 3 C和D，与文献的结果吻合。 其中被发现一个变异的FA在不同的位置之间的应力，但仅用于一个给定基底硬度。这些结果与FA 机械敏感性机制整体对比，假定一个恒定应力是通常普遍接受的理解。有趣的是，这个零线性关系引起了非零