曲格列酮、高糖、IL1β对人肾小管上皮细胞内皮细胞蛋白C受体影响.pdfVIP

曲格列酮、高糖、IL-1 β对人肾小管上皮细胞内皮细胞蛋白C 受体的影响 中文摘要 曲格列酮、高糖、IL-1 β对人肾小管上皮细胞内皮细胞 蛋白C 受体的影响 中文摘要 目的 通过流式细胞仪及RT －PCR 方法观察人肾小管上皮细胞 （HKC ）上EPCR 表达情况，及葡萄糖、IL-1β 对HKC 上EPCR 表达的影响，旨在探讨高糖、IL-1β 致 肾损害的机制。同时，观察曲格列酮对高糖、IL-1β 调节内皮细胞蛋白C 受体作用的 影响，探讨曲格列酮抑制肾间质纤维化达到肾保护的新机制。 1、高糖、IL-1β 对人肾小管上皮细胞内皮细胞蛋白C 受体 表达影响的研究 方法 将人肾小管上皮细胞 （HKC ）进行细胞培养，然后采用流式细胞仪技术检 测培养细胞上EPCR 的表达。采用不同浓度（0mmol/L 、5mmol/L、10mmol/L、30mmol/L、 50mmol/L ）的D-葡萄糖作用于HKC 细胞系，观察不同浓度D-葡萄糖对EPCR 基因 表达的影响；同时以50mmol/L 的D-葡萄糖分别作用不同时间（0、3h、6h、12h、24h ）， 观察D-葡萄糖不同作用时间对EPCR 基因表达的影响。 采用不同浓度 （0ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml ）的 IL-1β 作用于 HKC 细胞系，观察不同浓度IL-1β 对EPCR 基因表达的影响；同时以20ng/ml 的IL-1β 分别作用不同时间 （0h、3h、6h、12h、24h ），观察IL-1β 不同作用时间对EPCR 基 因表达的影响。 结果 1. EPCR在HKC上有很高表达，达97.9% 。 2. 高糖明显下调HKC细胞中EPCR mRNA 的表达，特别是在D-葡萄糖浓度为 30mmol/L、50mmol/L时EPCR mRNA 的表达呈显著性下降（p0.01 ）并有明显的剂量 反应关系。50mmol/L 的D-葡萄糖作用HKC细胞12h和24h时EPCR表达明显受到抑制 （p0.01 ）。D-葡萄糖对EPCR mRNA表达的影响与作用时间有明显的线性关系。 I 中文摘要 曲格列酮、高糖、IL-1 β对人肾小管上皮细胞内皮细胞蛋白C 受体的影响 3. IL-1β在2ng/ml、5ng/ml时HKC细胞EPCR mRNA 的表达量未见明显减低，在 10ng/ml时HKC细胞EPCR mRNA 的表达量开始明显降低（p0.01 ）。20ng/ml IL-1β处 理3h时即能明显下调HKC细胞中EPCR mRNA 的表达，EPCR mRNA 的表达变化与作 用时间呈明显的时效关系。 结论 1. 人肾小管上皮细胞高表达EPCR 。 2. D-葡萄糖能明显抑制HKC 上EPCR，呈时间、剂量依赖性。IL-1β 能明显抑制 HKC 上EPCR ，呈时间依赖性。 3. EPCR 表达下降可能是高糖、IL-1β 致肾损害的机制之一。 2 、曲格列酮对高糖、IL-1β 调节内皮细胞蛋白C 受体作用的研究 方法 将 HKC 细胞进行细胞培养，细胞生长至 80%融合后分为三个组，第一组 为空白对照组，同样条件下不加任何药物培养24 小时。第二组为阳性对照组，分别 加入含50mmol/L 的D-葡萄糖、20ng/ml 的IL- 1β 的培养基培养24 小时，不加曲格列 酮。第三组为实验组，分为四个系列，第一系列用含0µmol/L 曲格列酮的培养基培养 12h 后分别加入含50mmol/L 的D-葡萄糖、20ng/ml 的IL-1β 的培养基，再培养24h 。 第二系列、第三系列、第四系列培养方法与第一系列相同，但曲格列酮浓度分别为 5umol/L、10umol/L、20umol/L 。检测各组细胞EPCR 的表达，观察不同浓度曲格列 酮对葡萄糖、IL-1β 调节内皮细胞蛋白C 受体的作用。 结果 1. 50mmol/L 的D-葡萄糖、20ng/ml 的IL-1β 能明显抑制HKC 细胞中EPCR 的 表达。 2. 在 D