第2章 微生物的分离与纯培养.ppt

三、用液体培养基分离纯培养 0.048 0.048 + 0.0012 + 0.0002 = 0.975 稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多 平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长 例如：若同一稀释度的试管中有95%表现为不生长，则 生长的试管中仅含一个细胞的几率为：4.8%； 含二个细胞的几率为：0.12%； 含三个细胞的几率为：0.002% 在有细菌生长的试管中得到纯培养的几率为97.5% 连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物 稀释法原理： 如果大多数平行稀释试管里没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物 1878年，Lister 分离乳酸链球菌时所使用的微量 注射器和酒杯培养装置 注射器的最小吸取量： 0.00062 毫升 四、单细胞（孢子）分离 一般采用显微操作仪，在显微镜下进行； 操作难度与细胞或个体的大小成反比； 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。 五、选择培养分离 抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生长更快； 使待分离的微生物在群落中的数量上升，方便用稀释法对其进行纯化。 微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化 使待分离的微生物生长“突出”； 直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养物。 方法： 五、选择培养分离 1. 利用选择平板进行直接分离 待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制 高温下培养：分离嗜热细菌 培养基中不含N：分离固氮菌 培养基加抗生素：分离抗性菌 五、选择培养分离 1. 利用选择平板进行直接分离 待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物 颜色反应：分离特定的菌株 五、选择培养分离 2. 富集培养 从自然界中分离到所需的特定微生物 特定的环境条件 仅适应于该条件的微生物旺盛生长 待分离微生物在群落中的数量大大增加 2. 富集培养 富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理 条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微 生物的需要。 根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类 分离培养在特定环境中能生长的微生物 方法 应用范围 稀释倒平板法涂布平板法 平板划线法 稀释摇管法 液体稀释法 单细胞分离法 选择培养分离 用途广泛 用得最多 方法简便,多用于分离细菌 主要分离严格厌氧菌 适用于培养细胞较大的微生物 局限于高等专业化的科学研究 适用于分离某些生理类型较特殊的微生物 微生物纯培养分离方法的比较 * * * 第2章 微生物的分离与纯培养 本章内容： 一、无菌技术(重点) 二、用固体培养基分离纯培养（重点） 三、用液体培养基分离纯培养（掌握） 四、单细胞分离 五、选择培养分离 微生物的基本特点： 小！ 在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性 微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存 培养技术在微生物学中具有重要意义！ 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果 纯培养技术是进行微生物学研究的基础！ 培养物：在一定条件下培养、繁殖得到的微生物群体 混合培养物：含有多种微生物的培养物 纯培养物： 只有一种微生物的培养物 从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。 一、无菌技术 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染； 1、微生物培养的常用器具及其灭菌 常用的器具： 试管、瓶子、培养皿等 1887年，R J Petri 发明 Petri dish 高温干热灭菌 高压蒸汽灭菌 试管、瓶子、培养皿等 常用的灭菌方法： 1、微生物培养的常用器具及其灭菌 常用的器具： 2、接种操作 无菌操作： 火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行 2、接种操作 无菌操作： 在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行 二、用固体培养基分离纯培养 培养基 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 二、用固体培养基分离纯培养 培养基 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 琼脂 柯赫（Robert Koch） 的助手W Heese和 他的夫人Fran Heese 二、用固体培养基分离纯培养 培养基类型 凝固剂含量 （以琼脂计） 主要用途 固体培养基 1.5%-2.0% 微生物分离、鉴定、计数 半固体培养基 0.5%-0.8% 观察微生物运动特征、鉴定菌种 液体培养基 无 大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究 二、用固体培养基分离纯培养 菌落（colony）： 单个（或聚