02紫外可见分光光度法分解.pptVIP

标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。 引起这种偏离的因素（两大类）： （1）光的因素，即仪器的非理想引起的； （2）化学因素。 正偏离 负偏离 A c 标准曲线 4、影响朗伯—比耳定律的因素 （1）光的因素 单色光不纯，导致负偏差。 散射光的影响，胶体、乳浊液或悬浊液由于散射的作用使吸光度增大，或入射光不是垂直通过比色皿（非平行入射光）产生正偏差 为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色器。 此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。 (2) 化学因素 吸光质点的相互作用，浓度较大时，产生负偏差， 朗伯-比尔定律只适合于稀溶液（C 10-2 mol/L )。 平衡效应：溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡： CrO42- ＋2H＋ = Cr2O72- ＋H2O 溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不相同。故此时溶液pH 对测定有重要影响。 　　根据 Lambert- Beer定律，以该物质吸收光谱图中的λmax为入射光，首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液cs，测其As，再将样品溶液推入光路，测其Ax ，则试样溶液的浓度cx为： 此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法。 二、紫外可见分光光度法的定量方法 P24 目视比色法——标准系列法 原理：将标准溶液与被测溶液在同样的条件下进行比较，当溶液液层厚度相同,颜色深度一样时,两者的浓度相等。 1.单一组分的测定 例： 维生素B12的含量测定精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度（单位ug/mL) ⑴测定步骤 ①首先配制一系列被测物的标准溶液，测其吸光度，绘出A-c工作曲线； ②在相同条件下，测出被测物的吸光度Ax; ③根据Ax的值在工作曲线上查处cx的大小。 ⑵适用范围 大批重复试样的分析。 (2) 标准曲线法(工作曲线法) P29 2、多组分的定量方法 P32 三种情况： （1）两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 令E=εb λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Ca （2）两组分吸收光谱部分重叠 原则：比尔定律、加和性原理 步骤： （3）两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定 3、差示分光光度法 P33 当在吸光度很高或很低的范围内进行定量分析时，相对误差比较大。 本法是用比试样浓度稍低（高吸光度差示分光光度法）或稍大（低吸光度差示分光光度法）的溶液做参比溶液进行测定。 高吸收法在测定高浓度溶液时使用。选用比待测溶液浓度稍低的已知浓度溶液作标准溶液，调节透光率为100%。 低吸收法在测定低浓度溶液时使用。选用比待测液浓度稍高的已知浓度溶液作标准溶液，调节透光率为0。 最精密法是同时用浓度比待测液浓度稍高或稍低的两份已知溶液作标准溶液，分别调节透光率为0或100%。 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度等都可能发生变化。 第四节 紫外可见分光光度法的条件选择P28 (一）测定波长的选择 “吸收最大?max ，干扰最小” A ? X ?max Y （二）参比溶液(空白溶液) 在测定时用空白溶液调节仪器A=0(T =100%),以消除溶液中其它物质的干扰,抵消比色皿对光反射、吸收. 1)溶剂参比：只有被测组分有色，试液、试剂、显色剂均无色(无吸收)，则可用溶剂如纯水作参比溶液. 2)试剂参比：试液无色, 显色剂或其它试剂有色(有吸收), 则应选试剂空白. 3)试样参比：试剂、显色剂均无色(无吸收),试液中其它组分有色, 则应采用不加显色剂的试液作参比溶液. 选择参比溶液的总原则是:使试液的吸光度能真正反映待测组分的浓度. 4)退色参比：指在吸光试样溶液（或显色溶液）中加入适当试剂，将吸光物质或显色化合物破坏（或颜色退去）后的溶液. 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er (36.8) 0.43