1.2基因工程的基本操作程序(第1课时)分解.pptVIP

1.2基因工程的基本操作程序第1课时 学习目标： 1、了解基因工程操作的步骤 2、了解每步的方法特点 基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 第二步：基因表达载体的构建 第三步：将目的基因导入受体细胞 第四步：目的基因的检测与鉴定 自学指导：阅读课本8-15页，思考： 简要描述基因工程操作包括哪几步？ 一、目的基因的获取 目的基因主要是______________________,从供 体细胞中获取。 编码蛋白质的结构基因 获取目的基因的常用方法有哪些? (一)从基因文库中获取 （二）利用PCR技术扩增 （三）人工合成 基因组DNA 限制酶 基因重组 转化细菌 体外包装 1)基因组文库 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库 基因组文库 部分基因文库（cDNA文库） 是由生物的某一特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成多种互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 2)部分基因文库（cDNA文库）： 基因重组 反转录酶 mRNA cDNA 2.原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶:能够识别启动子上结合位点的一种蛋白质，将核糖核苷酸聚合成mRNA. 2.原核细胞的基因结构 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列.包括启动子和终止子 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点（启动子）。 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 （二）利用PCR技术扩增目的基因 PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制 ①原理： ②前提： ③条件： PCR技术（聚合酶链式反应） ④过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 ⑤结果：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） 指数 2n （三）人工合成法： 如果基因较小，核苷酸序列已知，可以利用DNA合成仪用化学方法直接人工合成