高效液色谱.pptVIP

二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 2.主要部件 (2)梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 c. 示差折光检测器P237（differential refractive index detector） d. 荧光检测器（fluorescence detector） 一、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 二、 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 四、 离子色谱ion chromatography 五、 离子对色谱ion pair chromatography 六、 排阻色谱size- exclusion chromatography 七、 亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 液相色谱分析法 一、液相色谱固定相 stationary phase of HPLC 二、液相色谱流动相 mobile phase of HPLC 一、液相色谱固定相 stationary phases of LC （3）化学键合固定相 化学键合固定相的特点 2.液-固吸附分离固定相 3.离子交换色谱分离固定相 4. 空间排阻分离固定相 二、液相色谱的流动相 mobile phases of LC 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 一、影响分离的因素 factors influenced separation 2.流速 二、分离类型选择 choice of separation types 三、 HPLC的应用 application of HPLC 2. 稠环芳烃的分析 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 3.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 * * 能在线检测 不能在线检测 色谱柱可重复多次使用 色谱柱只用一次 分析速度快 分析速度慢 柱效高40000-60000plate 柱效低 填料颗粒小2－50um 填料颗粒大 高压40－50Mpa 常压或减压 高效液相色谱 经典液相色谱 仪器制造难度大一些 仪器制造难度小一些 运行和操作难一些 运行和操作容易 无较灵敏的通用检测器 有灵敏的检测器 柱长有限，柱效不很高 毛细管色谱有很高柱效 可以用于热不稳定物质 不能用于热不稳定物质 几乎可以分析各种物质 分析挥发物质（约20％） 高效液相色谱 气相色谱 1.目前尚无通用的高灵敏检测器; 2.仪器昂贵; 3.维持成本高; 4.溶剂通用甲醇，有毒, ∴所以能用GC, 尽量不用HPLC. 特点：高压、高效、高速、高灵敏度 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 1.流程 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液