培养基灭菌1.ppt

绝大多数的发酵过程需要在无菌条件下进 行，因此培养基的灭菌必须合理的设计，使之既 能达到所需的无菌程度，又能保证培养基中有效 成分的破坏在允许的围之内,培养基的优劣直接关 系到实验和研究的成败与否及微生物发酵生产的 效率。 一.灭菌的概念和必要性 灭菌：是指用物理或化学因子杀灭有生活 能力的细菌营养体和芽孢或孢子的方法。 消毒：消除病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。 工程上灭菌：是指使用物理或化学方法将培 养基中的杂菌的细胞和孢子杀灭至不影响发酵为限。灭菌是为了保证进行纯培养（纯种）发酵。 2、干热灭菌 　干热灭菌比湿热灭菌需要更高的温度与较长的时间。 （1）干烤：利用干烤箱，加热160～180℃2小时，可杀死一切微生物，包括芽胞菌。主要用于玻璃器皿、瓷器等的灭菌。 三. 湿热灭菌的原理 湿热灭菌：就是直接用高温蒸汽灭菌。蒸汽在冷凝时释放出 大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障而死亡。 湿热灭菌的效果，取决与致死温度和致死时间。 致死温度：是杀灭微生物的极限温度。 致死时间：是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。 热阻（对热抵抗力）：微生物在某一特定条件（一定 的温度、加热方式）的死亡时间。 相对热阻：指在相同条件下两种微生物热阻的比值。 芽孢的热阻特别高的原因：①芽孢具有吡啶二羧酸，能增强对热抵抗力②芽孢厚而且结构致密，热不易透过③芽孢的游离水分少，蛋白质含水量较营养细胞蛋白质含水量低。 在实际生产中，由于不能完全了解杂菌的数量和类型，因此要以相对热阻大的芽孢作为灭菌的依据。 工业上湿热灭菌分为分批灭菌和连续灭菌 分批灭菌（实消）：将培养基置于反应器中用 蒸汽加热，达到预定灭菌温度后维持一定时间， 再冷却到发酵温度，然后接种发酵，这叫分批 灭菌。 连续灭菌（连消）：将培养基在罐外连续进行 加热、维持和冷却然后进入到反应器的杀菌方 法就是连续灭菌。 四.培养基在工程上要解决的课题 将培养基中的杂菌总数杀灭到可以接受的总数需要多高的温度、多长的时间。选择最佳灭菌条件，达到既杀灭杂菌又尽量减少营养成分的破坏。 2、对数残留定律：在一定温度下，微生物的受热死亡符合单分子反应动力学即微生物的热死亡速率与任一瞬间残存的活菌数成正比。 热死灭动力学方程 dN/dt =-KN 式中： N------- 残存的活菌数（个） t-------- 灭菌时间（min） K------- 杀菌速率常数（min-1）或叫死亡速率常数。 K是判断微生物受热死亡难易程度的基本依据，其大小与微生物的种类和加热温度有关。 dN/dt------- 菌的瞬时变化率，即死亡速率。 将方程积分后得： N0：开始灭菌(t=0) 时原有活菌数 Ns：经时间t后残存活菌数 D值：活的微生物在受热过程中减少到原来数目的1/10（ Ns/N0= 1/10） 3. 温度对杀菌速率常数K的影响 微生物受热蛋白质变性而死亡，温度对杀菌速率常数的影响可以用阿累尼乌斯（Arrhenins)方程表示：K=Ae-E/RT K-------- 杀菌速率常数（死亡速率常数）（min-1） A-------- 频率因子（阿累尼乌斯常数），因菌种的不同而异。 E--------活化能（J/mol） T--------绝对温度（K）T= t +273.15 R--------气体常数 8.36J/mol.K(或1.98cal/mol.K) 从阿累尼乌斯方程可以得出以下结论： 1）活化能E的大小对K值有重大影响，其他条件 相同时E愈高，K值愈低，热死速率愈慢。 2）不同菌的孢子热死反应的E可能各不相同，在 相同T灭菌，尚不能肯定E低的孢子的死亡速度一 定比E高的快，因为K并不是唯一决定于E。 3）对方程两边取对数得： lnK= - E/RT + lnA 在不同的温度T下做灭菌实验，求得相应的K值，按lnK----1/T作图，从直线的斜率可以求出E。 4）K是E和T的函数，K对T的变化率与E有关。 反应的活化能E愈高，温度T的变化对K的影响愈大。 对上式两边求导数得：dlnK/dT=△E/(RT2) 六. 影响培养基灭菌的因素 1. 营养成分的保持 　　湿热灭菌时，微生物被热死的同时，培养基的 营养成分也遭到了一定的破坏。特别是氨基酸和维 生素。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而 相互之间发生反应，造成培养基中原有营养成分的 数量变化，因而影响培养基质量