微生物学_09b微生物与基因工程论述.ppt

PCR 技术的实际用途 ① 可用于 DNA 的扩增和克隆，制备单链或双链 DNA 探针；也可用于定位诱变和 DNA 测序。 ② 在临床医学上可用于检测病原体，诊断遗传病，以及对癌基因的分析确定。 ③用于法医,以鉴别个体和判定亲缘关系。 基因诱变 　寡核苷酸介导的突变 盒式诱变 　PCR介导的突变 9.7 基因工程的应用 基因工程药物 转基因植物 转基因动物 基因治疗 在微生物研究中应用 基因工程药物 胰岛素 人生长激素 干扰素 白细胞介素2 粒细胞集落刺激因子 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 红细胞生成素 EPO 组织纤溶酶原激活剂 生长激素 促生长素 抗血友病因子Ⅷ 脱氧核糖核酸酶 葡糖脑苷脂酶 鼠单克隆抗体 基因工程药品 —— 胰岛素 胰岛素是治疗糖尿病的特效药。一般临床上使用的胰岛素主要从猪、牛等家畜的胰腺中提取，每100kg胰腺只能提取4～5g胰岛素。 用该方法生产的胰岛素产量低，价格昂贵，远不能满足社会需要。1979年，科学家将动物体内的胰岛素基因与大肠杆菌DNA分子重组，并在大肠杆菌内实现了表达。 1982年，美国一家基因公司用基因工程方法生产的胰岛素投入市场，售价降低了30%～50%。 干扰素是病毒侵入细胞后产生的一种糖蛋白。干扰素几乎能抵抗所有病毒引起的感染，是一种抗病毒的特效药。此外干扰素对治疗某些癌症和白血病也有一定疗效。 传统的干扰素生产方法是从人血液中的白细胞内提取，每300 L血液只能提取出1 mg干扰素。1980～1982年，科学家用基因工程方法在大肠杆菌及酵母菌细胞内获得了干扰素，是传统的生产量的12万倍。1987年上述干扰素大量投放市场。 基因工程药品 —— 干扰素 基因工程药品 —— 生长激素 治疗侏儒症的唯一方法，是向人体注射生长激素。而生长激素的获得很困难。以前，要获得生长激素，需解剖尸体，从大脑的底部摘取垂体，并从中提取生长激素。 现可利用基因工程方法，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从 450 L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万具尸体的全部产量。 基因工程药物的生产过程 1、目的基因的提取：分离或合成外源基因。 2、体外重组：外源基因与载体体外连接，构建重组DNA分子； 3、转化：重组DNA分子导入细胞。 4、筛选与鉴定； 5、基因表达：控制适当条件，外源DNA表达。 6、表达产物的纯化 下面以胰岛素为例介绍基因工程药物的生产过程 A链和B链分别表达法 基因工程菌的构建战略： 化学合成A链序列 表达产物的后处理路线 人胰岛素原表达法 A链和B链同时表达法 上述三种重组大肠杆菌的构建路线均采用胰岛素或胰岛素原编码序列与大肠杆菌b-半乳糖苷酶基因拼接的方法，所产生的融合型重组蛋白表达率高、稳定性强，但不能分泌，以包涵体的形式存在于胞质中。 基因治疗 1990年9月14日，美国马里兰州的Bethesda医院里，年仅4岁的女孩阿尚蒂(Asshanthi DeSilva)接受了人类历史上第一次基因治疗临床试验，为其主持治疗的是美国国立卫生研究院的C．W．Blease教授、K．W．Culver教授和(French Anderson)教授等。 阿尚蒂忠有一种严重的复合型免疫功能缺乏症（SCID），这是一类致命性遗传性疾病。 该疾病如果不加治疗，患者在l－2年必死无疑。所幸的是世界上这种疾病非常罕见，在美国每年只有40名患儿出生。 阿尚蒂就是由于先天性缺乏腺苷脱氨酶(ADA)而导致SCID的,由于ADA酶的缺陷，人体细胞内脱氧腺苷大量积累，导致T淋巴细胞的中毒死亡；没有了T淋巴细胞，人体免疫系统就基本上被破坏了，这种情况类似于艾滋病患者晚期，很容易感染死亡。 阿尚蒂只有生活在无菌的隔离病房，依赖没完设了的PEG—ADA酶的体外注射，通过这种外源ADA酶补充体内的不足． ADA酶进入细胞谈何容易？低效的治疗，频繁的输注、昂贵的价格、潜在的病毒危害、免疫反应让阿尚蒂的生命看不到明天的希望。 正是由于这种疾病的特殊性，该病成为基因治疗早期探索和开展临床试验的理想病种。1990年美国政府终于批准了世界上第一例基因治疗临床试验－－对阿尚蒂实施ADA基因治疗。 医生和科学家们从阿尚蒂身上抽血，从中分离出少量的T淋巴细胞（患者体内T细胞数量很少），在体外进行生长和扩增，通过一种改造的反转录病毒将正常的ADA基因转移进去; 虽然，这种方法并没有修复她缺陷的ADA基因，但是可以代偿性表达原来基因缺陷，使得不少淋巴细胞可以大量表达ADA酶。 在从阿尚蒂身上取血培养一个半星期后，这种改造过的能够正常表达ADA的淋巴细胞通过常规的静脉缓缓地输回到女孩的血液中。基因手术结束后，阿尚蒂一切体征正常。 1个月后，阿尚蒂再次接受了遗传改造细胞的回输