医学分子生物学-上课用-12.基因诊断资料.ppt

可以实现对DNA、RNA、蛋白质的高通量快速检测。 * * 根据对致病基因或相关基因的了解程度决定基因诊断的技术途径选择。 直接诊断：直接分析致病基因分子结构及表达是否异常 间接诊断：利用多态性遗传标志与致病基因进行连锁分析 * 中国人当中，17个密码子的突变最多。 * * 可以?-珠蛋白基因的cDNA为模板，结合随机引物法合成探针。进行southern印迹杂交。 结合核酸分子杂交检测。 * 重复序列以各自核心序列（重复单元）首尾相连多次重复，称为串联重复序列，其重复次数在人群中存在变异，形成多态性。 串联重复序列散在分布于染色体上。 重复单位为6～25 bp，称为小卫星DNA。重复单位为2～6 bp，如（TA）n, (CGG)n等，称为微卫星DNA。 * * * 结合southern杂交进行检测。 重复序列两侧的序列是保守性的，可以设计特异的引物，进行扩增。 * RFLP结合southern杂交 * 脆性 X 智力低下基因1（FMR1）5ˊ非翻译区遗传不稳定的(CGG)n 三核苷酸重复序列的异常扩增以及相邻CpG 岛的异常甲基化。 正常人中约为 8～50 拷贝。 男性和女性携带者增多到52～200拷贝，相邻的CpG 岛未被甲基化，称为前突变（premutation）。 男性患者和脆性部位高表达的女性中，达到200～1000拷贝，相邻的CpG岛也被甲基化，称为全突变（full mutation）。 全突变可关闭相邻FMR1基因的表达，FMR1 mRNA在几乎所有患者不表达或只有低表达，从而出现临床症状。 * HAV是逆转录病毒。 * 1．结肠癌常见基因变异：在癌发展过程的不同阶段发生不同的基因突变。 APC（adenomatous polyposis coli）是结肠癌发生过程中第一个突变基因。K-ras原癌基因突变也是结肠癌形成的早期事件。 DCC（deletion of colorectal cancer）基因失活是结肠癌发展的晚期事件。抑癌基因DPC4和MADR2也可能会因18q等位基因丢失而失活。 p53基因的突变是结肠癌发展过程的晚期现象。 DNA修复基因也与结肠癌有关。如hMSH2、hMLH1、 hPMS1或hPMS2基因的突变所致的DNA错配修复缺陷与遗传性非息肉性结肠癌的发生有关。 * 1985年，英国遗传学家Jeffeys等人用TR的核心序列为探针进行RFLP分析时，检测到许多HVR，并产生相应的图谱，所得图谱具有高度的个体特异性，达到了如同人类指纹那样的高度专一性，所以称其为DNA指纹图谱（DNA fingerprinting）。 * 检测小卫星DNA * * * 2. FVⅢ基因突变的检测 （1）依赖于FVⅢ基因内或旁侧的多态性标记的连锁分析 （2）RFLP连锁分析 （3）VNTR分析 （4）短串联重复序列（STR）的连锁分析 * 三、脆性X综合征 脆性 X 智力低下基因1（FMR1）5ˊ非翻译区遗传不稳定的(CGG)n 重复序列的异常扩增以及相邻CpG 岛的异常甲基化。 正常人中约为 8～50 拷贝。 携带者增多到52～200拷贝，相邻的CpG 岛未被甲基化，称为前突变. 男性患者和脆性部位高表达的女性中，达到200～1000拷贝，相邻的CpG岛也被甲基化，称为全突变. 全突变可关闭相邻FMR1基因的表达，FMR1 mRNA在几乎所有患者不表达或只有低表达，从而出现临床症状。 * * 脆性X综合征常用基因诊断方法： 1．PCR-ASO 2．DNA连锁分析 3．Southern印迹杂交法 4．PCR扩增 * * 一、病毒性疾病 甲型肝炎病毒（HAV） HAV系RNA病毒，利用RT－PCR技术可从粪便中检测出甲型肝炎病毒的基因组RNA。 乙型肝炎病毒（HBV） 设计保守区序列引物，扩增各型HBV DNA片段；设计位于可变区的引物扩增某一亚型HBV DNA，以便分型。 丙型肝炎病毒（HCV） HCV为正链RNA病毒，先逆转录成cDNA，再进行巢式PCR检测HCV。 第三节 传染病的基因诊断 * * 二、细菌引起的疾病 结核分枝杆菌 先设计一对特异性引物，用PCR技术扩增出一383 bp序列，再用探针杂交，灵敏度可达到100个细菌水平。 幽门螺杆菌（HP） 主要采用PCR技术：①检测HP染色体DNA特异片段；②检测HP尿素酶A基因；③用PCR-RFLP鉴别HP菌株。 * * 三、寄生虫及衣原体感染 疟原虫 卡氏肺孢子虫 衣原体感染 诊断方法：核酸杂交和PCR技术