实验二、园艺产品可溶性蛋白质含量的测定讲述.pptVIP

实验三、 园艺产品可溶性蛋白质含量的测定 一、实验目的要求 学习使用考马斯亮蓝G—250法测量蛋白质含量 二、原理 考马斯亮蓝G-250法是利用蛋白质—染料结合染色 的原理， 定量的测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的 方法。考马斯亮蓝G—250在游离状态下呈红色，与蛋白 质结合后为蓝色。最大光吸收由465 nm变成595 nm，通 过测定595nm处光吸收的增加量,可知与其结合蛋白质的 量。 在一定蛋白质浓度范围内（0—1000微克/毫升μg/ml ），蛋白质—色素结合物在595nm波长下光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的测定。蛋白质与考马斯亮篮结合在2分钟左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时内保持稳定。 缺点 : 是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异 三、实验用品　 材料 : 菜豆 仪器设备: 分光光度计、研钵 离心管、 烧杯，试管　 10000转/分离心机 试剂：牛血清白蛋白 考马斯亮蓝 85％磷酸 95%乙醇　 (1)标准蛋白质溶液： 称取牛血清蛋白100mg，加水溶解于100ml蒸馏水中，即为1000 μg /ml的溶液。 （2）考马斯亮蓝试剂 称取25mg考马斯亮蓝G-250，溶于25ml95％乙醇中；加