第八章非水介质中的酶催化总结.ppt

Fig. 4 The Cell-ALD 5k, Cell-ALD 10k and Cell-ALD 20k activity after pre-incubation with various concentrations of [Bmim][Cl]. The pre-incubation temperature was 50 °C with samples taken at 2 h of incubation. Fig. 7 Total amount of reducing sugars released from MCC 疏水溶剂夺取酶分子表面必需水的能力比亲水性溶剂小 2.有机溶剂与反应的相容性 底物相溶 溶剂必须对于该主反应是惰性 3．溶剂对底物和产物的影响 如：脂肪酶催化月桂醇和丁基硬脂酸的酯化反应，在十二烷（lgP=6.6）的活力只达到苯（lgP=2）中酶活力的57.5%。 亲水性底物应选择疏水性较强的溶剂，而疏水性底物应选择疏水性弱的溶剂更好。 4.溶剂的pH值 酶的“pH记忆”：将酶先溶解在少量最适pH值缓冲溶液中直接冻干或从最适pH值缓冲溶液中沉淀，转入微水有机溶剂中，仍可以保持酶的电离状态。 pH缓冲对体系 采用高疏水性酸和它的钠盐组成缓冲对或高疏水性的碱与它的盐酸盐组成缓冲对来维持反应体系的pH值。 常用有机酸有：苯基硼酸、对硝基苯酚、三苯基乙酸、对甲苯磺酸和二苯基次磷酸、乙酸等． 第三节?? 有机介质对酶性质的影响 一、稳定性 热稳定性提高。 储存稳定性提高。 某些酶在有机介质与水溶液中的热稳定性 酶 介质条件 热稳定性 猪胰脂肪酶 三丁酸甘油酯 水， pH7.0 T1/2 26 h T1/2 2 min 酵母脂肪酶 三丁酸甘油酯/庚醇 水，pH7.0 T1/2 =1.5 h T1/2 2 min 脂蛋白脂肪酶 甲苯，90℃，400 h 活力剩余40％ 胰凝乳蛋白酶 正辛烷，100℃ 水，pH 8.0, 55℃ T1/2 = 80 min T1/2 = 15 min 枯草杆菌蛋白酶 正辛烷，110℃ T1/2 = 80 min 核糖核酸酶 壬烷，110℃，6 h 水，pH 8.0, 90℃ 活力剩余95％ T1/2 10 min 酸性磷酸酶 正十六烷，80℃ 水，70℃ T1/2 = 8 min T1/2 = 1 min 腺苷三磷酸酶 ( F1-ATPase) 甲苯，70℃ 水， 60℃ T1/2 24 h T1/2 10 min 限制性核酸内切酶 （Hind Ⅲ） 正庚烷，55℃，30d 活力不降低 β-葡萄糖苷酶 2-丙醇，50℃，30 h 活力剩余80％ 溶菌酶 环己烷，110℃ 水 T1/2 =140 min T1/2 = 10 min 本章 目录 稳定性增强的原因： （l）酶结构刚性增强； （2）水含量有限。 在酶分子的不可逆变性过程中，水是一个必要的参予者。 二、活性 与水中相比，许多酶在有机溶剂中的催化活力降低。 1．扩散限制 非均相催化，酶粉的凝集，导致酶与底物的接触受扩散限制的影响。 2．冷冻干燥的影响 冻干失活，冷冻干燥过程会使酶二级结构发生较大变化 添加多元醇和底物或底物类似物作为冷冻保护剂。 3.底物解析能 很多酶都具有疏水活性中心，当水被有机溶剂代替时，底物被解析到达活性中心比在水中困难。 4．过渡态底物的稳定性 很多酶的酶-底物反应过渡态是高极性的，并部分暴露在溶剂中，水比极性小的溶剂更能使中间体稳定。 三、选择性 介质工程（溶剂工程） ：通过改变反应介质来改变和控制酶催化反应的选择性。 1．底物专一性 对于同一酶反应而言，不仅在水与有机溶剂中的底物专一性可能不同，而且在不同的有机溶剂中其专一性也不同。 如：胰凝乳蛋白酶等蛋白水解酶在水溶液中催化疏水的苯丙氨酸和亲水的丝氨酸的N-乙酰氨基酸酯的水解反应速度，前者比后者快5×104倍，而在正辛烷中催化转酯反应与水溶液中的结果相反。 在20种不同溶剂中，枯草杆菌蛋白酶催化Ｎ-乙酰-Ｌ-氨基酸乙酯与正丙醇之间的转酯反应，发现在不同的溶剂中,酶对苯丙氨酸酯和丝氨酸酯的反应专一性各不相同，最多相差68倍。 底物专一性改变的原因是由于溶剂的改变导致底物在有机溶剂与酶的活性中心之间的分配系数发生了改变。 2．对映体选择性 ①??溶剂的影响。 酶在不同介电常数的有机溶剂中，酶分子结构刚性程度不同，高介电性溶剂使酶的柔性增加时，酶的立体选择性降低。 ②?含水量的影响 过高的含水量影响立体选择性? 溶剂的几何形状也影响酶的对映体选择性。 3．前手性选择性 例如脂肪酶催化潜手性二氢吡啶二羧基酯类衍生物选择性水