第一章微生物检验鉴定技术概述.ppt

Streak plate 第一节 微生物检验基本知识 二、分离纯化 ４、富集培养法 　　 富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其它微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。 第一节 微生物检验基本知识 二、分离纯化 ５、厌氧法 在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把它放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌石蜡于培养基表面，使与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。 有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 第一节 微生物检验基本知识 三、培养 1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养。 好氧培养(Aerobic Incubation) ：也称“好气培养”。 厌氧培养(Anaerobic Incubation)：也称“厌气培养”。 第一节 微生物检验基本知识 三、培养 ２、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。 　　固体培养：solid incubation 　　液体培养：liquid incubation 第二节 微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 二、生理生化试验 三、血清学试验 第二节 微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察 微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。 2、微生物培养特性观察 E. Coli (G-) 绿脓杆菌单鞭毛 S. aureus (G+) 梭状芽孢杆菌 曲霉 青霉 酵母 炭疽芽孢 革兰染色法，丹麦病理学家C.Gram 创立（1884 ） （1）涂片： （2）晾干： （3）固定 （4）结晶紫色染色：1min。 水洗 （5） 媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。 水洗 （6） 脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20~25s至流出液无色，立即水洗。 （7） 复染：滴加蕃红复染5min。水洗 （8） 晾干：晾干或者用吸水纸吸干。 （9） 镜检：先用低倍，再用高倍，最后用油镜。 （10）实验完毕后的处理： ①浸过油的镜头：a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2~3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2~3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。 ②细菌染色玻片用废擦镜纸将香柏油擦干 Gram’s staining 第二节 微生物常规鉴定技术 一、形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察 2、微生物培养特性观察 微生物培养特性的观察是微生物检验鉴别中的一项重要内容。 １）细菌的培养特征 包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。 细菌在液体培养基中生长性状观察A.深浊度：观察是否透明、轻度浑浊、中度浑浊或极度浑浊，还有均匀浑浊、颗粒状浑浊、絮状浑浊。B.沉淀：试管底有无沉淀，沉淀物呈颗粒状、粘稠状或絮状。轻摇时云雾状、絮状或发辫状升起。C.表面：有无菌膜及附着于管壁的菌环D.色素及气味细胞在固体培养基上菌落生长性状观察A.大小：菌落直径在1mm以下为露滴状菌落；1-2mm为小菌落；2-4为中等大菌落；4-6mm或更大为大菌落。B.形状：有圆形，有规则形、根足形、菌丝状等C.边缘：有整齐、锯齿状、纤毛状、卷发状等D.表面：有光滑、湿滑、粗糙、颗粒状、皱丝状、同心状、放射状等E.降起度：有角平、隆起、脐状、扭扣状F.颜色：有无色、白色、灰白色、金黄色、柠檬色、绿色、红色等G.透明度：有透明、半透明、不透明等 一、形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察 2、微生物培养特性观察 １）细菌的培养特征 ２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。 霉菌有分支的丝状体，菌丝粗