第3讲PCR和DNA测序重点.pptVIP

* * * ? * * * * * * 第二代DNA测序技术 现有的技术平台主要包括：Roche/454 FLX、Illumina/Solexa Genome Analyzer 和 Applied Biosystems SOLID system。 三个技术平台各自的优点： 454 FLX的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到400bp； Solexa测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成本也低，在数据量相同的情况下，成本只有454测序的1/10； SOLID测序的准确度高，原始碱基数据的准确度大于99.94%，而在15X覆盖率时的准确度可以达到99.999%，目前第二代测序技术中准确度最高。 核心思想：边合成边测序（Sequencing by Synthesis)，即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列。 例如，Illumina/Solexa Genome Analyzer测序的基本原理：在Sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP，当DNA聚合酶合成互补链时，每添加一种dNTP就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测DNA的序列信息。 DNA测序技术经历了漫长而曲折的发展历程。迄今为止，获得的绝大部分DNA序列都是基于Sanger测序法获得的 双脱氧法(Du