第三章——组织培养方案.ppt

第三章 园林植物苗木培育技术 ①消毒 ——无菌操作室内的灭菌方法 ①消毒 ——外植体的表面灭菌 化学消毒剂灭菌法 70%酒精、HgCl2、次氯酸钠、过氧化氢、次氯酸钙等 外植体表面灭菌操作前的准备工作： ① 无菌水、漂洗瓶、切割用器皿和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。 ② 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。 外植体表面灭菌的一般过程 外植体取材 备用 无菌水充分漂洗3～5次 无菌条件下，消毒剂处理 无菌条件下，70%酒精表面消毒30S～60S 预处理 影响外植体消毒效果的因素： ① 消毒剂种类 ② 消毒剂使用浓度 ③ 消毒处理时间 ②接种 ——全部应在无菌条件下进行 外植体接种操作前的准备工作 ②接种 ——全部应在无菌条件下进行 外植体接种的具体步骤 切割外植体 培养瓶倾斜靠近酒精灯火焰 瓶盖外部在火焰上旋转灼烧数秒钟 旋开瓶盖，扣放在酒精灯旁边 瓶口在火焰上旋转灼烧数秒钟 用无菌镊子将外植体均匀放置在培养基上 瓶盖在火焰上灼烧两圈 盖紧瓶盖 ②接种 ——全部应在无菌条件下进行 常用外植体的种类 茎尖 带节茎段 节间部茎段 叶片和叶柄 鳞片 3.4.2植物组织培养的育苗技术 2）操作技术 （4）培养物的管理和试管苗的移栽 培养条件 3.4.2植物组织培养的育苗技术 2）操作技术 （4）培养物的管理和试管苗的移栽 继代培养 3.4.2植物组织培养的育苗技术 2）操作技术 （4）培养物的管理和试管苗的移栽 生根 无根试管苗 生根 诱导生根的基本培养基，生长素 3.4.2植物组织培养的育苗技术 2）操作技术 （4）培养物的管理和试管苗的移栽 移栽 * * 3.4组织培养育苗 植物组织培养：根据植物细胞的全能性原理，将植物的器官、组织、细胞，接种到人工配制的培养基上，在人工控制的条件下，进行离体培养，使其产生完整植株的过程。 试管苗 3.4.1植物组织培养技术的实用性特点 （1）植株组培快繁、周期短、节省材料 （2）应用广泛 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （1）实验室 洗涤室 称量室 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （1）实验室 培养基制备室 灭菌室 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （1）实验室 接种室 缓冲室 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （1）实验室 培养室 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （1）实验室 培 养 室 准 备 室 灭菌室 储藏室 接种室 缓冲室 植物组织培养实验室布局示意图 为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯； 培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗； 培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门； 无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （2）仪器设备和用具 酸度计 细菌过滤器 超净工作台 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （2）仪器设备和用具 高压蒸汽灭菌锅 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （2）仪器设备和用具 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （2）仪器设备和用具 3.4.2植物组织培养的育苗技术 1）基本条件 （3）培养容器 3.4.2植物组织培养的育苗技术 2）操作技术 （1）玻璃器皿洗涤 3.4.2植物组织培养的育苗技术 2）操作技术 （2）培养基配制 培养基的重要性 基本培养基：指只含有维持离体植物细胞基本生命活动所需的营养成分的培养基。通常包括水分、无机营养成分和有机营养成分，不包括激素和天然有机附加物。 完全培养基：指在基本培养基的基础上另外附加激素或天然有机附加物所组成的培养基。 ①培养基的构成 培养基 水 无机盐类 有机营养 大量元素化合物 微量元素化合物 氨基酸类 糖类 维生素类 植物生长调节剂 生长素类 细胞分裂素类 凝固剂 组织培养时，植物激素的使用规律 在生长素存在的条件下，细胞分裂素的作用有加强的趋势，但二者在使用上有一定的顺序关系，处理顺序不同，培养物的分化状态也不同。规律如下： ⑴先用生长素处理，后用细胞分裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不容易分化，容易产生多倍体细胞。 ⑵先用细胞分裂素处理，后用生长素处理，细胞分裂也分化。 ⑶用生长素和细胞分裂素同时处理，细胞脱分化后分化频率提高。但二者的使用浓度比值可以决定器官分化方向：生长素/细胞分裂素比值高时，有利于根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽分化，抑制根形成。比值适中时，