非生物及生物胁迫下脱水蛋白研究进展概述.pptVIP

RACE 自然干旱处理 克隆到contig1045基因 编码蛋白-17kDa NtDhn17 烟草Annotations Nicotiana tabacum Genbank 050206 2个注释为脱水蛋白基因克隆 contig1045 contig9354 Dehydrin 1 烟草脱水蛋白基因克隆及表达谱分析 1 烟草脱水蛋白基因克隆及表达谱分析 contig1045片段的获得 contig1045克隆的cDNA全长及编码蛋白序列 contig1045克隆的cDNA全长及编码蛋白序列 1 烟草脱水蛋白基因克隆及表达谱分析 表达谱分析 DMP,青霉菌灭活菌丝体,微生物代谢产物,植物系统抗病性诱导剂 1 烟草脱水蛋白基因克隆及表达谱分析 启动子分析 启动子序列克隆-热不对称PCR 1 烟草脱水蛋白基因克隆及表达谱分析 启动子分析 启动子顺式作用元件分析及表达活性检测 顺式作用元件名称 可能的功能 出现频率 ABRE 响应ABA 2 ATCT-motif 光响应元件 1 BoxI 光响应元件 1 BoxIII 蛋白结合位点 1 Box-W1 真菌激活子响应元件 2 CGTCA-motif 茉莉酸响应元件 3 G-Box ABA响应元件 4 GARE-motif 赤霉素响应元件 2 HSE 分子伴侣结合元件 2 MBS 干旱响应元件 3 TC-rich repeat 生物胁迫响应元件 3 TCA-element 水杨酸响应元件 4 TGACG-motif 茉莉酸响应元件 3 启动子顺式作用元件分析及表达活性检测 顺式作用元件名称 可能的功能 出现频率 ABRE 响应ABA 2 ATCT-motif 光响应元件 1 BoxI 光响应元件 1 BoxIII 蛋白结合位点 1 Box-W1 真菌激活子响应元件 2 CGTCA-motif 茉莉酸响应元件 3 G-Box ABA响应元件 4 GARE-motif 赤霉素响应元件 2 HSE 分子伴侣结合元件 2 MBS 干旱响应元件 3 TC-rich repeat 生物胁迫响应元件 3 TCA-element 水杨酸响应元件 4 TGACG-motif 茉莉酸响应元件 3 小结 RACE - contig1045 - NtDhn17 NtDhn17基因在正常生长植物体内存在本底表达 NtDhn17基因受ABA；自然干旱和高渗胁迫；JA和SA；过氧化氢；微生物代谢产物（DMP）上调表达 1 烟草脱水蛋白基因克隆及表达谱分析 2 NtDHN17蛋白生物信息学分析 NtDHN17二级结构预测 在线工具 HNNC、MLRC、PHD和Predator 二级结构以无序卷曲为主 2 NtDHN17蛋白生物信息学分析 NtDHN17蛋白由169个氨基酸组成 为Y2SK2类脱水蛋白 NtDHN17(MW):17,773Da MtDHN(pI):6.81 YSK类脱水蛋白保守结构域比对 2 NtDHN17蛋白生物信息学分析 在线工具 /molkit/hydropathy/index.html Gly 21.3%,亲水值 1 NtDHN17蛋白是亲水素 NtDHN17蛋白氨基酸序列分析 在线工具 /molkit/hydropathy/index.html Gly 21.3%,亲水值 1 NtDHN17蛋白是亲水素 NtDHN17蛋白氨基酸序列分析 NtDHN17是无序蛋白 80%氨基酸序列为无序结构 NtDHN17蛋白无序性预测 在线工具 http://prdos.hgc.jp/cgi-bin/top.cgi 小结 NtDHN17蛋白是一个Y2SK2类中性脱水蛋白 NtDHN17蛋白二级结构以无序卷曲为主 NtDHN17蛋白是一个高度亲水的无序蛋白 2 NtDHN17蛋白生物信息学分析 3 NtDHN17蛋白功能初步研究 NtDHN17亚细胞定位——细胞核 3 NtDHN17蛋白功能初步研究 原核表达获得体外重组NtDHN17蛋白 IPTG浓度 诱导时间 过柱纯化 预测大小：17.7kDa SDS：~25kDa 无序蛋白特征之一：迁移率 NtDHN17蛋白 生化性质 研究方法 高温诱导变性沉淀 胰蛋白酶敏感实验 3 NtDHN17蛋白功能初步研究 蛋白聚集沉淀实验 无序性 亲水性 3 NtDHN17蛋白功能初步研究 NtDHN17蛋白无序结构验证-热稳定性 热聚集实验表明NtDHN17蛋白具有无序蛋白 典型特征，在高温处理后不发生聚集沉淀； 与锌离子结合后，获得高级构象，失去了 无序蛋白在高温条件下保持水溶性的特征。 DHN(-)表示未经热处理的NtDHN17蛋白； DHN(+)表示经100℃热处理30分钟的NtDHN17蛋白； DHN-Zn2+(+)表示与锌离子结合后热