薄层色谱法讲课.pptVIP

什么是TLC？ 薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC） 是将适宜的固定相喷涂（或喷雾）于玻璃板，塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别，检查或含量测定等。 TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化的物质的分离。 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样和展开剂用量少，展开速度快。 TLC经常被用于探索柱色谱分离条件和监测柱色谱过程 。 在进行化学反应时，可利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。 薄层色谱参数 一、保留参数 1. Rf值 用来表征斑点位置的基本参数是比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L0 流动相与固定相 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素： 固定相 要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表面 积； 在展开剂中不溶； 与展开剂和式样组分不发生化学反应； 具有适当的吸附能力； 机械强度和稳定性。 选择：分离亲脂性化合物，选择氧化铝，硅胶，乙酰化纤维素以及聚酰胺 分离亲水性化合物，选择纤维素和离子交换纤维素及硅藻土。 一般，被分离组的极性强，选择吸附能力弱的吸附剂；反之，选吸附能力较强者。 种类： 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性  硅胶：化学分子式为mSiO2·nH2O,多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 常用硅胶规格： 硅胶H，不含黏合剂 硅胶G，含煅石膏（硫酸钙） 硅胶S，用5%淀粉作黏合剂 硅胶，用羧甲基纤维素（CMC）作黏合剂 硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 氧化铝 　碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合 物，如生物碱、脂溶性维生素等； 中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳 定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 活度也与含水量有关。 流动相（展开剂） 要求：待测组分很好地溶解不与组分发生 化学反应； 组分斑点圆而集中，无拖尾现象； 注意 Rf的选择。 选择：“相似相溶”原则 同吸附柱色谱 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 展开剂 选择原则：根据被分离物质的极性 Stahl简图：极性物质—活度低（活性级大）的吸附剂--极性展开剂 　 展开剂 先用单一溶剂展开， 若Rf值太小， 则加入一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等， 如果Rf值太大， 则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。 可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。 薄层色谱操作 薄层板制备 载板—— 5cm×20cm、10cm×20cm、20×20cm的2mm厚的玻璃板 放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。 要求光滑、平整、洗净后不附水珠。 展开 展开方式：上行展开 展开过程： 展开缸预先用展开剂饱和，平衡系统，薄层板浸入展开剂展开（距边缘0.5-1cm），挥干展开剂 定性、定量方法 定性方法 利用保留值 测定Rf值 测定相对Rf值，即Rx值。 利用二维色谱（改变色谱条件，比较Rf值是否一致） 高效薄层色谱法（HPTLC） HPTLC是应用高效薄层板与薄层扫描仪相结合的方法，它是在普通TLC基础上发展起来的一种更为灵敏、高效、快速、精密、准确的色谱分析技术。 高效薄层板 一般是使用粒度5~7μm的吸附剂，多用高聚物如聚丙烯酸等为粘合剂，薄层厚度一般为0.2㎜， 它比普通包层板分离度好、灵敏度高、速度快。 薄层性能 吸附颗粒小，流动相展开速率慢，容易达到平衡，分离效率和测定精度高。 影响因素：吸附剂的粒度、分子扩散系数、展开距离和分离组分的Rf等。 点样与展开 展开后所形成的斑点越小而圆，分离效果越好。HPTLC是采用自动点样，可调节原点的大小、能控制点样次数、点样间距、点样容器与薄层接触的时间。 展开方式与TLC无甚区别。分为直线展开或径向展开。 薄层扫描 原理 薄层定量方法