薄层色谱鉴别讲课.ppt

概念 基本原理 在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物。 比移值 实验操作 实验仪器 ⑴ 载板 ⑵ 固定相（吸附剂）或载体 ⑶ 涂布器 ⑷ 点样器 ⑸ 展开室 实验操作 2 供试品的制备：按照各药品质量标准规定的方法进行提取分离。制得的供试品应放置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样量。3 对照品溶液的制备：可按质量标准规定精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止造成对照品污染。 5 展开 展开室 展开剂（流动相）的选择：主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。 展开剂要接触到薄层板下沿，但切勿接触到样点。 盖上盖子，展开。 观察展开情况。 取出薄层板 影响展开的因素 A 相对湿度的影响 B 溶剂系统的影响 　C 溶剂蒸汽的影响　 D 薄层板类型的影响　 E 温度的影响 　F 展距的影响 预饱和分为2部分：1、展开缸的预饱和：在展开之前，使展开剂蒸汽在展开缸内饱和，使展开缸汽液状态达到一定的稳定状态，此时尚未放薄层板。2、薄层板的预饱和：在展开缸饱和后，放入已经点样完毕的薄层板，进行饱和，使薄层板整体差异性减小。具体做法是：在双槽层析玻璃缸内,将其中一个槽内倒入配好的展开剂,另一个槽内放入薄层板,盖好上面的玻璃盖,这时候就是在预饱和。 关于饱和时间：根据展开剂而定。 1、展开剂组分极性差异不大的且挥发性好的，时间可以短一些，一般15－20分钟即可；2、极性差异大的，且挥发性差异大的，时间要长一些，一般要30－60分钟；3、极性差异大的，且挥发性差异不大的，时间要长一些，一般要20－30分钟；4、极性差异不大，且挥发性差不大的，时间可以短一些，一般要10－15分钟；5、水饱和有机试剂或有机试剂饱和水的，时间一般都比较长，30－60分钟。6、另外，大家打开关闭展开缸的速度要快，放板取板的速度也要快， 否则预饱和的效果全被你后期的 操作给抹杀了！！ F 展距的影响 薄层色谱法---跑板 点样???? 用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端2cm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样（用电吹风的热风吹干再点），以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应， 2.展开???? 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂，密封室顶的盖。 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管， 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。 展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。（展开缸中得展开剂弃去，密封在容量瓶中得展开剂可在当天使用） 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。 Rf值一般控制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。 3.斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。 展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。 注意事项： 一．预饱和分为2部分： 1、展开缸的预饱和：在展开之前，使展开剂蒸汽在展开缸内饱和，使展开缸汽液状态达到一定的稳定状态，此时尚未放薄层板。 2、薄层板的预