第2章核酸的化学解答.ppt

ATP的性质 ATP 分子的最显著特点是含有两个高能磷酸键。ATP水解时, 可以释放出大量自由能。 ATP 是生物体内最重要的能量转换中间体。ATP 水解释放出来的能量用于推动生物体内各种需能的生化反应。 ATP 也是一种很好的磷酰化剂。磷酰化反应的底物可以是普通的有机分子，也可以是酶。磷酰化的底物分子具有较高的能量（活化分子），是许多生物化学反应的激活步骤。 （三）环化核苷酸（cAMP和cGMP） cAMP(3’,5’-环化腺苷酸)和cGMP(3’,5’-环化鸟苷酸)的主要功能是在组织细胞中起着传递信息的作用称为第二信使。 cAMP和cGMP的环状磷酯键是一个高能键。在pH7.4, cAMP和cGMP的水解能约为43.9 KJ/mol，比ATP水解能高得多。 DNA双螺旋结构的要点 （1）DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为5′端→3′端，而另一条链的方向为3′端→5′端。 （2）嘌呤和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90°角。 （3）螺旋横截面的直径约为2nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈的高度）为3.4 nm。 （4）维持两条DNA链相互结合的力是链间碱基对形成的氢键。碱基结合具有严格的配对规律:A与T结合，G与C结合，这种配对关系，称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键，G与C之间形成三个氢键。 在DNA分子中，嘌呤碱基的总数与嘧啶碱基的总数相等。 DNA双螺旋的稳定性 DNA双螺旋结构在生理条件下很稳定。 维持这种稳定性的因素包括：两条DNA链之间形成的氢键，碱基堆积力。 双螺旋结构内部形成的疏水区，消除了介质中水分子对碱基之间氢键的影响； 介质中的阳离子（如Na+、K+和Mg2+）中和了磷酸基团的负电荷，降低了DNA链之间的排斥力等。 改变介质条件和环境温度，将影响双螺旋的稳定性。 DNA的存在形式 3、DNA的功能 （四）tRNA的结构与功能 * tRNA的一级结构特点 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 - CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C A：测DNA： 纯的DNA样品OD260/OD280应为1.8，OD260m／OD230应大于2.0。 1) OD260/OD280大于1.9时，表明有RNA污染。 2) 小于1.6时，表明样品中存在蛋白质或酚污染； 3) OD260/OD230小于2.0时，表明溶液中有残存的盐和小分子杂质，如核苷酸、氨基酸、酚等。 注： 可能出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况。 B：测RNA 纯的RNA样品其OD260／OD280应介于1.7-2.0之间，OD260/OD230比值应大于2.0。 1）若RNA样品OD260/OD280比值太小，说明有蛋白质或酚的污染； 2）比值大于2.0时，可能被异硫氰酸胍等污染； 3）OD260/OD230比值小于2.0时表明有小分子及盐存在。 DNA变性 DNA复性 核酸的杂交 第四节 核酸的分离、纯化与含量的测定 核酸制备的步骤： 2、定糖法 RNA：核糖→ 糠醛→ →绿色物质（670-680nm） DNA：脱氧核糖+二苯胺→兰色物质（595-620nm） 3、定磷法 核酸含磷量为9.5% 1g磷相当于10.5g核酸 一、核酸的一般性质： 两性解离，但酸性强 电泳行为——泳向正极（pH7-8） 纯的DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末。都微溶于水，不溶于一般有机溶剂；在70%乙醇中形成沉淀。 粘度 DNARNA 分子大小单位：分子量（道尔顿，D）、 碱基对数目（bp） DNA相对分子质量很大，一般在106－1012。RNA相对分子质量较小，一般在1－10万， 离心沉降常数（S）：生物大分子在单位离心力场里的沉降速度为恒定值。 常用CsCl密度梯度平衡超速离心技术研究核酸分子。 沉淀行为——加盐（中和电荷）；乙醇。 DNA的(浮力)密度(buoyant density) 把DNA放在密度梯度介质的上面，以相当高的速度离心时，DNA在梯度中迁移，直到达到同它自己的密度相同的部位为止，即漂浮于介质的某一密度梯度中，该部位称作DNA的(浮力)密度。不同的DNA具有不同的(浮力)密度。可利用(浮力)密度的差别，借助密度梯度超离心法来分离制备DNA。 DNA的(浮力)密度与其分子的碱基组成有密切的关系，与G·C