第1章蛋白质化学解答.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 维系蛋白质分子的一级结构：肽键、二硫键 维系蛋白质分子的二级结构：氢键 维系蛋白质分子的三级结构：疏水相互作用力、氢键、范德华力、盐键 维系蛋白质分子的四级结构：范德华力、盐键 a 盐键（离子键 ） b 氢键 c 疏水相互作用力 d 范德华力 e 二硫键 离子键 氢键 范德华力 疏水相互作用力 蛋白质的一级结构决定三级结构 1961 Christian Anfinsen 天然核酸酶 变性的处于还原态的核酸酶 * 8 M 尿素可以破坏氢键，巯基乙醇可以破坏二硫键（一级结构）； * 透析的方法，可以有效去除蛋白质中的小分子物质 如尿素与巯基乙醇 透析袋 高盐浓度溶液 缓冲液 透析初始状态 平衡时的状态 蛋白质分子结构与功能的关系 蛋白质分子具有多样的生物学功能，需要一定的化学结构，还需要一定的空间构象。 （一）蛋白质一级结构与功能的关系 1. 种属差异与同源性 蛋白质一级结构的种属差异十分明显，但相同部分氨基酸对蛋白质的功能起决定作用。根据蛋白质结构上的差异，可以断定它们在亲缘关系上的远近。 2.分子病 蛋白质分子一级结构的氨基酸排列顺序与正常有所不同的遗传病。 镰刀状红细胞贫血（sickle-cell anemia） 从患者红细胞中鉴定出特异的镰刀型或月牙型细胞。 β-链 1 2 3 4 5 6 7 Hb-A Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Lys… Hb-S Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Lys… Val 取代Glu 含氧-HbA O2 O2 粘性疏水斑点 含氧HbS 脱氧HbS 疏水位点 血红蛋白分子凝集 4.11.4镰刀形细胞贫血病是一种分子病 在正常细胞之中存在着许多异常的镰刀形的细胞，这种非正常血液病称之镰刀形细胞贫血病。镰刀形细胞不能象正常细胞那样通过毛细血管。因此血液循环被破坏，还可能发生严重的组织损伤。镰刀形细胞易破裂，导致红细胞的减少。 还可以通过哪些方法检测？ 杂合子 纯合子 正常 迁移方向 非变性电泳检测 非变性电泳检测 蛋白质构象与功能的关系：别构效应 别（变）构作用：含亚基的蛋白质由于一个亚基的构象改变而引起其余亚基和整个分子构象、性质和功能发生改变的作用。因别构而产生的效应称别构效应。 血红蛋白是别构蛋白，O2结合到一个亚基上以后，影响与其它亚基的相互作用。 血红蛋白 肌红蛋白 组织 肺 波耳效应（Bohr effect） 氧与血红蛋白的结合受到H+与CO2浓度的影响，即pH对氧饱和曲线的影响 六、蛋白质的分类 纤维状蛋白 1.蛋白质形状 球状蛋白 2.分子组成 简单蛋白 （按溶解度） 结合蛋白（按辅基） 清蛋白 球蛋白 谷蛋白 醇溶蛋白 精蛋白 组蛋白 硬蛋白 核蛋白 糖蛋白与蛋白聚糖 脂蛋白 色蛋白 磷蛋白 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Histidine 组氨酸 *侧链的咪唑环具有缓冲能力。 甲醛滴定法：甲醛封闭氨基端，酸碱滴定羧基含量 HCHO HCHO R—CH—COO- NH3+ R—CH—COO- NH2 + H+ OH- 中和滴定 R—CH—COO- NHCH2OH R—CH—COO- N(CH2OH)2 游离氨基酸含量测定： 茚三酮法：与Pro反应产生黄色物质，其它为蓝紫色。在570 nm（蓝紫色）或440 nm（黄色）定量测定（μg级）。 游离氨基酸含量测定： 2,4-二硝基氟苯(DNFB)的反应 NO2 F O2N + H2N—CH—COOH R NO2 O2N HN—CH—COOH R + HF 弱碱性 DNP-氨基酸 H2N—CH—COOH + R N CH3 CH3 O=S=O Cl 5-二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl） pH9.7 40℃ N CH3 CH3 O=S=O HN—CH—COOH R DNS-氨基酸 取代DNFB测定蛋白质N端氨基酸，灵敏度高 5-二甲氨基萘磺酰氯法 异硫氰酸苯酯法（PITC法） —N=C=S + N—CH—COOH H H R PITC —N—C—N—CH—COOH H H R S PTC-氨基酸 —N—C H R S N C C O PTH-氨基酸