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第1章　蛋白质 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少一氨基酸残基的肽链，同时PTC-氨基酸在酸性溶液中环化生成PTH-氨基酸。可以多次重复。 分离PTH-氨基酸 层析法鉴定 酰胺平面与α-碳原子的二面角（ φ和ψ ） 一级结构的意义 2.α-螺旋（α-helix)结构 肽链主链骨架围绕中心轴盘绕成螺旋状，称为α-螺旋。 右手螺旋：3.6个AA/圈，螺距0.54nm；每个AA的高度为0.15nm。 氢键维系：链内氢键（AA1…AA4），平行长轴；每一个氨基酸残基上的亚氨基氢（N-H）与前面第四个氨基酸残基上的羰基氧(C=O)之间形成链内氢键。 侧链伸向螺旋外侧， 其形状、大小、电荷等均影响α-螺旋的形成。 无规则卷曲示意图 超二级结构类型 肌红蛋白三级结构 血红蛋白四级结构 核糖核酸酶变性与复性作用 蛋白质的纯化方法 SDS（十二烷基磺酸钠）是一种阴离子型表面活性剂，它能够与蛋白质多肽链中的氨基酸残基按大约1 ? 1.4比例结合。 每一个蛋白质分子都因为结合了许多的SDS而带有大量的负电荷，而蛋白质分子原有的电荷则可以忽略。该法主要利用了蛋白质分子量大小不同而分离蛋白质。 用已知分子量的蛋白质作为标准，则可以估算出不同蛋白质的分子量。 （三）蛋白质分离纯化的一般注意事项P44 （1）盐析 在蛋白质的水溶液中，加入大量高浓度的强电解质盐如硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，可破坏蛋白质分子表面的水化层，中和它们的电荷，因而使蛋白质沉淀析出，这种现象称为盐析。 而低浓度的盐溶液加入蛋白质溶液中，会导致蛋白质的溶解度增加，该现象称为盐溶。 破坏蛋白质的水化膜，中和表面的净电荷。 盐析法是最常用的蛋白质沉淀方法，该方法不会使蛋白质产生变性。 各种蛋白质的亲水性及荷电性均有差别，因此不同蛋白质所需中性盐浓度也有不同，只要调节中性盐浓度，就可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分散沉淀析出，这种方法称为分段盐析。 （2）弱酸或弱碱沉淀法(等电点沉淀） 用弱酸或弱碱调节蛋白质溶液的pH处于等电点处，使蛋白质沉淀。 弱酸或弱碱沉淀法机理： 破坏蛋白质表面净电荷。 酸 酸 碱 碱 碱 酸 溶液中蛋白质的聚沉 （3）有机溶剂沉淀法： 在蛋白质溶液中，加入能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮等，蛋白质产生沉淀。 有机溶剂沉淀法的机理： 破坏蛋白质的水化膜。 注意：有机溶液沉淀蛋白质通常在低温条件下进行，否则有机溶剂与水互溶产生的溶解热会使蛋白质产生变性。 2、不可逆沉淀 定义：在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀（次级键）、强酸碱沉淀（影响电荷）、重金属盐沉淀（Hg2+、 Pb2+ 、Cu2+、 Ag2+）和生物碱试剂或某些酸类沉淀等都属于不可逆沉淀。 3.重金属盐沉淀(条件：pH 稍大于pI为宜) 当pH 稍大于pI时，蛋白质颗粒带负电荷这样就容易与重金属离子结合成不溶性盐而沉淀。 重金属沉淀法的机理： 重金属盐加入之后，与带负电的羧基结合。 4.生物碱试剂沉淀法（条件：pH稍小于pI） 生物碱是植物组织中具有显著生理作用的一类含氮的碱性物质。 能够沉淀生物碱的试剂称为生物碱试剂。生物碱试剂一般为弱酸性物质，如单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等。 生物碱试剂沉淀蛋白质的机理： 在酸性条件下，蛋白质带正电，可以与生物碱试剂的酸根离子结合而产生沉淀。 例如：“柿石症”（鞣酸使蛋白质凝固，在柿皮中含量高） 5.加热变性沉淀法 几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固。少量盐促进蛋白质加热凝固。 当蛋白质处于等电点时，加热凝固最完全和最迅速. 如：煮鸡蛋 酶的制备：超氧化物歧化酶的提取 （五）蛋白质的变性与复性作用 在某些物理化学因素作用下，蛋白质分子内部的次级键断裂，二、三级空间结构被破坏，分子的紧密构象变成了松散的无序状态。天然构象破坏，从而引起理化性质改变，生物活性丧失。叫做蛋白质的变性作用。 注意：蛋白质变性后一级结构没有发生变化。只是空间构象发生变化。 造成蛋白质变性的因素： 化学因素：强酸、强碱、尿素、重金 属盐、乙醇、去污剂等。 物理因素：加热、剧烈振荡、紫外线、 X线等。 变性 复性 注意：并不是所有变性蛋白都可以复性的！蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地