微生物限度译文usp汇编.doc

微生物限度检验 本章提供了从原材料到成品的试验，包括需氧微生物数量的预测和所有药物条款中规定的微生物种类的预防试验。假如自动化的方法经验证和现在行方法等效或有更好的结果，可以取代现在的试验。在准备和实验中，处理样品时遵守无菌操作。除非有特别说明，样品简单“培养”的地方，应把容器放在30℃--35℃的空气中恒温培养24—48小时。术语“生长”经常用在此处，换言之，指明微生物的存在和预测增殖。 预备试验 在本章实验中实验结果的验证提供了大量充分的论证，用于试验的样品本身在实验条件下不限制可能存在的微生物的生长。因而，用固定成分做试验的预备和环境的需求，接着分别用金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单孢菌和沙门菌接种检验材料的稀释样品中。可以通过加1毫升不少于10ˉ3浓度的肉汤培养24小时的微生物的稀释液到实验材料的第一步稀释液（PH7.2的磷酸盐缓冲液，大豆酪蛋白消化物培养基或乳糖液状培养基）中和下面的实验过程来实现。在有关培养基中没有微生物生长，检验内容无效，需要变更程序，包括（1）对剩余的相同数量的实验材料增大稀释液的体积，或（2）在稀释液中掺入适宜的灭活剂，或（3）通过（1）（2）的共同作用，使接种物能够生长。下面是一个配料和他们的聚合物的例子，他们可以加到培养基中灭活样品中的抑菌物质：大豆蛋黄素（卵磷脂）。0.5%；聚山梨脂20，4.0%。作为比较，重复上面描述的实验，用液体酪蛋白消化物--大豆蛋黄素—聚山梨脂20培养基来验证实验材料中存在的防腐剂或其他抑制剂的灭活作用。如果抑菌物质存在样品中并且是可溶的，适宜的经验证的程序可以用于薄膜过滤技术（样品的无菌实验）中。 如果加了适量的灭火剂和增大了稀释液体积，仍不能恢复上面描述和不适用于薄膜过滤技术中物品的培养基的活力，能假定分离接种微生物的失败原因可归于产品的杀菌活力。该信息用于显示物品不可能被给定的微生物种类污染。为了确立物品的抑菌谱和杀菌活力，应继续监测。 缓冲液和培养基 培养基可以按下面的准备，或者假若脱水培养基是有供货商或分销商制备，可以被应用，他们与给定比例获得的培养基想比有相似的成分。 用给定的比例成分制备培养基，在水中溶解可溶性固体物，如果需要，加热溶解完全，使用的时候加盐酸或氢氧化钠到溶液中是培养基中的PH适宜。在25±2℃测定PH值。 配方中含琼脂时，使用含水量不超过15%的琼脂。配方中需用水时，使用纯水。 PH7.2盐酸缓冲液 原液——在1000毫升容量瓶中用500毫升水溶解34克磷酸二氢钾，加氢氧化钠（约175毫升）调PH到7.2±0.1，加水到体积线，混匀。分装后灭菌。冷藏储存。用的时候，用水按1：800稀释原液，灭菌。 培养基 除非有其他说明，培养基应该在高压蒸汽灭菌器（见无菌中的蒸汽灭菌法）内加热灭菌，灭菌时间要参考灭菌体积。 1，液体酪蛋白-大豆蛋黄素-吐温20培养基 酪蛋白胰酶消化物 20 g 大豆蛋黄素 5 g 吐温 20 40 mL 水 960 mL 在960毫升水中溶解酪蛋白胰酶消化物和大豆蛋黄素，在48°-50°的水浴中加热30分钟使溶解完全。加40毫升吐温20，混匀，按需要的分装。 2，大豆蛋黄素消化物琼脂培养基 酪蛋白胰酶消化物 15.0 g 大豆粉木瓜酶消化物 5.0 g 氯化钠 5.0 g 琼脂 15.0 g 水 1000 mL 灭菌后PH：7.3±0.2。 3，液体大豆蛋黄素培养基 参照无菌检测下大豆蛋黄素消化物培养基的配制。 4，甘露醇盐琼脂培养基 酪蛋白胰酶消化物 5.0 g 动物组织的胃蛋白酶的消化物 5.0 g 牛肉膏 1.0 g D-甘露醇 10.0 g 氯化钠 75.0 g 琼脂 15.0 g 酚磺酞 0.025 g 水 1000 mL 混匀，加热沸腾1分钟，并快速搅拌使溶解。 灭菌后PH值：7.4±0.2。 5， Baird–Parker 琼脂培养基 酪蛋白胰酶消化物 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 酵母膏 1.0 g 氯化锂 5.0 g 琼脂 20.0 g 甘氨酸 12.0 g 丙酮酸钠 10.0 g 水 950 mL 加热并快速搅拌，沸腾1分钟。灭菌，冷却到40°—50°，加入10毫升亚碲酸钾溶液（1：100）和50毫升蛋黄乳液。轻摇混匀，倒入盘子中。（蛋黄乳液：对整个鸡蛋外壳消毒，无菌打开鸡蛋，把蛋黄分离到一无菌量筒中。加无菌盐水TS，得到一个3：7的盐水蛋黄液。加到一无菌搅拌器中，高速混匀5秒钟。） 灭菌后PH值：6.8±0.2。 6，Vogel–Johnson 琼脂培养基 酪蛋白胰酶消化物 10.0 g 酵母膏 5.0 g 甘露醇 10.0 g 磷酸氢二钾 5.0