糖基转移酶与糖苷酶分解.ppt

第二节糖基转移酶及其应用 主要内容 糖转移酶简介 糖基转移酶在合成中的应用 Glycosyltransferases 应用‘activated’ sugar phosphates 作为糖供体，合成 glycosidic linkage ，糖受体通常为 nucleophilic group, usually an alcohol. 生成的糖苷可以为 O-, N-, S-, or C-glycoside 催化机理 Glycosyltransferases catalyze the transfer of glycosyl groups to a nucleophilic acceptor with either retention or inversion of configuration at the anomeric centre. This allows the classification of glycosyltransferases as either retaining or inverting enzymes. 糖基转移酶辅因子 Many, but not all, glycosyltransferases utilize divalent metal ion cofactors such as Mn2+ and Mg2+. … mainly in glycosyltransferases that are diphosphonucleoside-dependent. metal ion is coordinated to an oxygen of each of the two phosphate groups, as well as to side-chain carboxylates derived from the protein.. 糖基转移酶抑制剂 阻断糖供体的合成 糖基转移酶在合成中的应用 Reaction Catalyzed by a1,3-Galactosyltransferase 微生物中的糖供体 天然糖苷化合物中的糖一般为 C2, C3, C4 and/or C6 脱氧糖，而且大部分为6-deoxyhexoses family （Rhamnose） 原核生物糖转移酶具有糖供体的广泛性 6-deoxyhexoses 一般通过 TDP-sugars进行底物活化（TDP-Rhamnose） 碱性磷酸酶 糖基转移酶在 寡糖合成中的应用 （一）具有生物活性寡糖的酶法合成 Biomedical use of a-Gal soluble a-Gal antagonist to anti-Gal a-Gal conjugates in immunotherapy against bacteria, virus, and cancer cells. a1,3GalT 催化合成 a-Gal Epitopes 及其衍生物 Superbead Production of UDP-Gal with Superbeads. Superbead 用于寡糖合成 从多菌种发酵到Super bug Superbug technologies for the synthesis of a-Gal 分析合成途径 克隆表达验证相关酶 Clone and express individual enzymes in the biosynthetic pathway of a-Gal （克隆相关酶） Construction an artificial biosynthetic gene cluster and transfer into E. coli host cell.（构建基因簇并转化） Large scale production of a-Gal oligosaccharides using fermented and permeated cells. （发酵生产） pLDR20-aKTUF 检验多基因表达效果 Superbug 整个生产过程 大规模发酵产量 二 具有生物活性的含糖天然产物及其酶法合成 三：糖蛋白药物 蛋白糖基化的作用 目前糖蛋白表达的缺点和不足 四：糖疫苗 糖疫苗结构 Carrier protein: KLH (key hole Limpet hemocyanin) DT (diphtheria toxoids，CRM197)) TT (tetanus Toxoids) antigen protein Glycan (起免疫作用的只是糖链的一部分；oligosaccharides------ 有机合成或多糖降解获得) Coupling Bifu