黄曲霉毒素的检查方法讲述.pptVIP

由于黄曲霉素在自然界的广泛存在和对人、畜等生物的巨 大危害性（主要为致癌性，WHO将其列为自然界最强的三大致癌物之一），国际上将其纳入到严格控制的有害生物名单之中。农产品黄曲霉素含量是国际上食品卫生和农产品贸易中的必检指标。在我国加入WTO后，黄曲霉素（A flatoxin）也常常成为某些国家和组织限制我国农副产品出口的绿色壁垒，我国已连续多次因为黄曲霉素被检出而遭受农产品贸易损失。基于上述这些原因，我们必须加强农副产品及饲料产品中各型黄曲霉素检测的工作。 黄曲霉毒主要存在于发霉的粮、油、花生中，它是黄曲霉及寄生曲霉的代谢产物，毒性极强，可致肝癌，由于黄曲霉素是一种热稳定的化学物质，所以在烹调过程中不易破坏。预防措施主要是防霉。但如果食品已霉变产毒，则应采取适当去毒措施：如花生米可用排除霉粒法；大米可用碾轧法及水搓法；植物油可用加碱去毒法等。 目前已分离鉴定出18种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 以及由B1、B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2 等，B1为毒性及致癌性最强的物质。其毒性为氰化钾的10倍、砒霜的68倍,被列入严管的特剧毒物质！ 中药材的采收、加工、销售、直到使用需要一段相当长的时间，如果储存环境不合理，会造成药材或饮片发霉变质，特别是含油脂比较丰富的种子类药材，更容易发生变质，产生大量黄曲霉素。 2010版《中国药典》，修改增加了很多项目，尤其是增加了安全性控制指标，其中首次增加黄曲霉素控制。 2010版药典规定每1000g含黄曲霉素B1不得过5μg，含黄曲霉素G2、黄曲霉素G1、黄曲霉素B2和黄曲霉素B1的总量不得过10μg。 在药典一部中增加了僵蚕、酸枣仁、桃仁、胖大海、陈皮等五个品种的黄曲霉素检查。 测定方法 测定黄曲霉毒素B1的方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、荧光光度法、酶联免疫吸附测定法、免疫亲和层析柱-高效液相色谱法、免疫亲和层析柱-荧光光度计法等 薄层分析法( TLC) 最经典、最常用，至今仍为一些检测机构所用，也是一种国标方法 原理是用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来，经柱层析（它利用吸附剂对不同物质吸附能力的差异，用溶剂将混合物的组分逐一洗脱分离的一种分离方法）净化后，再在薄板上展开后分离，利用黄曲霉素的荧光特性,根据荧光斑点的强弱与标准比较确定其含量，对于一些组分很复杂的试样要双向展开，才能获得较高的灵敏度 TLC法设备简单，检测费用低，但操作繁琐费时，萃取和净化效果不理想，灵敏度差，对操作人员的身体健康存在较大程度的危害 液相色谱法( HPLC)  原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离，再用荧光检测器测定。当前，该方法大多用免疫亲和柱来净化分离，净化效果优异 该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素，检测速度快且定性与定量准确，检测限低，可作为仲裁法使用，但仪器设备价格昂贵前处理方法相对繁琐，若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加，对操作人员的身体健康仍存在一定的危害 原理是根据抗体和抗原之间特异性的免疫学反应，最后用测定酶活力的方法来增加测定的灵敏度 ELISA法将已知的待测AFB1抗原(或抗体)吸附于固定载体的免疫吸附剂上，洗涤未吸附的其他抗原和杂质,加入酶标记的AFB1 抗体(或抗原)与样品中的待测物(抗原或抗体)发生特异免疫学反应，形成酶标记的抗原一抗体复合物，洗涤后，加入酶底物，进行显色反应，通过颜色的深浅来测定AFB1抗原或抗体的含量。 ELISA法相对于HPLC具有特异性强、干扰小，样品的预处理简便，且快速、灵敏、高效等特点，而且回收率高，提取方法简单，可以进行定性和定量测定，并且对设备装置的投资比HPLC降低了许多，大大节约了测试的成本，因而ELISA已广泛用于食品中黄曲霉毒素的测定。 一种常用的国标方法 原理是利用黄曲霉素各种毒素的荧光特性，用荧光光度计测定样品中黄曲霉素的含量。大致过程是：试样先经甲醇／水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉素特殊抗体的免疫亲和柱净化（生物免疫学原理，此抗体对黄曲霉素具有专一识别功能），黄曲霉素键合在免疫亲和小柱的抗体上，用蒸馏水将柱上的杂质除去后，以甲醇将目标化合物洗脱下来，加显色剂于专用的荧光光度计中测定样品中的黄曲霉素含量 该方法对检测人员身体健康无危害,检测速度迅速，灵敏度高，适用于大量试样检测，且定量准确，但检测费用较高，需要配置专用设备，且不能对单一的毒素进行检测 几种黄曲霉素检测方法的特点 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 试样经过甲醇一水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免