吉林大学食品微生物8-微生物遗传-1讲述.ppt

基因（gene）是什么? 第三节 基因突变的规律及类型 微生物遗传学的几个基本概念 核酸是遗传物质基础的三个经典实验原理 质粒、质粒分离及质粒分类举例 基因及其突变的基本定义 营养缺陷型 抗性突变型 条件致死突变型 形态突变型 抗原突变型 产量突变型 第四节 基因突变的机制 用途：广泛用于检测环境和食品中是否存在化学致癌物。 特点：快速、准确、费用廉价 三、DNA损伤的修复 除了DNA聚合酶进行校正外，还通过几种不同的机制进行DNA的修复： (1) 光复活作用 (2) 切除修复 (3) 重组修复 (4) SOS修复 (4) SOS修复 这是在DNA分子受到较大范围的重大损伤时诱导产生的一种应急反应。涉及几个基因：recA、lexA、uvrA、uvrB、uvrC的共同作用。 此外，经紫外线照射的大肠杆菌还可能诱导产生一种称为错误倾向（error-prone）的DNA聚合酶，催化空缺部位的DNA修复合成，但由于它们识别碱基的精确度低，所以容易造成复制的差错，这是一种以提高突变率来换取生命存活的修复，又称错误倾向的SOS修复。 第五节 微生物的诱变育种 二、几种重要突变株的筛选方法 1. 抗性突变株的筛选 (1) 抗终代谢物结构类似物突变株的筛选 (2) 抗药性突变株筛选 2. 营养缺陷型的筛选 1. 抗性突变株的筛选 （1）抗终代谢物结构类似物的突变株 用途：筛选相应代谢物的高产菌株 （2）抗药性突变株 用途：筛选相应药物(抗生素) 的高产菌株或遗传标记制作 筛选的方法: a. 高于临界浓度的平板进行分离； b. 梯度平板法 a. 不含维生素的酪素水解液或氨基酸混合液 b. 维生素混合液 c. 0.1%碱水解酵母核酸液 （3）营养缺陷型的用途 生产菌 (氨基酸、核苷酸、维生素等高产菌需求)； 研究代谢途径和杂交、转化等遗传规律的遗传标记。 诱变育种的程序：实验讲义p175 出发菌株（纯化） 前培养（ CM ，培养至对数期） 菌悬液制备 活菌计数 诱变预备实验（剂量存活率曲线） 诱变处理（相对杀菌率为70-75%，30-70%） 活菌计数 中间培养（CM，培养过夜，克服表型延迟） 突变株分离 初筛 复筛 生产性能试验 菌种（鉴定与）保藏 1. 从生产中选育 2. 定向培育优良品种 一般指用特定因素长期处理微生物群体，同时不断地对它们进行移种传代，以达到积累并选择相应的自发突变株的目的。 例：卡介苗（牛型结核分枝杆菌的减毒活菌苗） 二、诱变及化学致癌物质的检测——Ames试验 “生物化学统一性”法则： 人和细菌在DNA的结构及特性方面是一致的，能使微生物发生突变的诱变剂必然也会作用于人的DNA，使其发生突变，最后造成癌变或其他不良的后果。 Ames试验的依据 诱变剂的共性原则： 化学药剂对细菌的诱变率与其对动物的致癌性成正比。 回复突变(reverse mutation或back mutation)： 突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变 得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。 美国加利福尼亚大学的Bruce Ames教授于1966年发明， 因此称为Ames试验 标准菌株要求： 检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmurium) 组氨酸营养缺陷型菌株(his-)的回复突变率（为了增加试验的敏感性，该菌株还应包括另外两个突变，一个是造成细胞表面透性增加的深度粗糙突变型，另一个是丧失切除修复能力的缺失型）。 Ames试验 斑点试验和平板掺入试验 紫外线诱变时必须在暗室、红光下进行 （1）光复活作用（photo