多元校正-分光光度法测定混合色素实验说课.doc

多元校正－分光光度法同时测定混合色素 一、【实验目的】 利用分光光度法测定胭脂红、柠檬黄、日落黄三种有机色素混合液的吸光度。 利用多元校正法（线性代数知识）处理数据，计算RSD和RSE、RSDt。 了解矢量数据的获取方法及其在多组分测定中的应用。 了解计算机技术及化学计量学基本方法在波谱解析中的应用。 二、【实验原理】 1. 实验背景： 食用合成色素是饮料等食品中的常用添加剂，但合成色素从合成工艺和结构上可能具有一定的毒性。因此，色素的种类、含量分析对食品工业具有重要意义。而胭脂红、柠檬黄、日落黄则是常见的食品着色剂。由于色素大多是有色有机物，对可见光有较强吸收，故采用分光光度法是测定色素。对于混合色素，需要将各组分分离后，才能进行定量测定。而化学计量学方法（矩阵和线性关系）为混合色素不经分离，利用分光光度法进行准确地同时测定提供了可能。 2. 实验原理： ①比尔定律：当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.②线性代数和矩阵： 设有nc个组分同时存在，配制一组已知样本共ns个溶液，其浓度矩阵为Cnc×ns，在nw个波长下测得吸光度矩阵Anw×ns。根据朗伯—比耳定律有： (1) 其中Knw×nc为吸光度矩阵，根据最小二乘法原理可求出各组分的纯物种谱，即K矩阵： (2) 式（2）中t和-1分别表示该矩阵的转置和逆。对于一个或一组未知样，同样在nw个相同波长下测定后，可用最小二乘法根据下式求出未知物的浓度。 (3) 此计算过程由计算软件处理，最终可以获得实际操作中所配制的混合色素的物质组成、各色素的体积和偏差。 三. 【仪器与试剂】 722分光光度仪（带四个比色皿）、Agilent8453UV-VIS分光光度仪、50ml容量瓶6个、5ml移液管4支、移液枪4支 胭脂红溶液（120mg/L）、柠檬黄溶液（100mg/L）、日落黄溶液（100mg/L）、HCl溶液（0.1 mol/L）、蒸馏水 【实验步骤】 按照各色素所加体积之和在14-16ml，最大体积和最小体积在3倍以上，每种色素加入体积有起伏，设计三种色素加入体积表格： 第一次实验： 第二次实验： No. 1 2 3 4 5 6 胭脂红/ml 0 6 11 2 8 4 日落黄/ml 4 2 0 8 6 10 柠檬黄/ml 10 8 6 4 2 0 No. 1 2 3 4 5 6 胭脂红 0 2 4 6 7 9 日落黄 6 10 0 2 5 7 柠檬黄 9 4 10 6 2 0 清洗容量瓶，开启仪器，洗洁精清洗比色皿。选取四组比色皿，以蒸馏水为参比，不断清洗至比色皿两两吸光度相差正负0.02以内，并以偏离最大者作为水/参比比色皿。 取6个50ml容量瓶，按照表格设计配制溶液，然后加入5mlHCl，稀释至刻度，摇匀。任意选择几组采用移液枪，实验结果出来后比较移液管和移液枪的精准度。 做参比的比色皿装HCl溶液或者蒸馏水，每次测定三组溶液，每三组一轮，从390nm测到540nm，记录各组的吸光度。 输入数据，软件处理数据。分析自己的溶液体积实际值和理论值的误差，分析RSD和RSE，利用多元校正，分析实验误差原因。 将溶液用Agilent8453UV-VIS分光光度仪测定，分析RSE和RSD。 【实验数据和图谱】 理论实验评价： RSD0.5％ 优秀；RSD1.0％ 好；RSD2.0％ 通过；RSD：2.0％-5.0％ 较差，需要重做；RSD5.0％ 找出错误原因并重做。RSE一般2%以下为优秀，3%为良好，3%-6%为可以接受，超过太多且不能找出明显原因则需要重做. 提高实验RSD： 提高实验RSE： 提高实验去除一组： 第一次实验RSD： 第一次实验RSE： 安捷伦仪器测定数据图： 由于第一次实验未来得及测安捷伦仪器，bbs上得到一份数据（1153610），得到相应的图谱和RSD：0.00065，RSE：2.347、0.819、0.503。与手动仪器比较，RSD：0.00068，RSE： 1.232、1.114、1.439。 从数据可以看出安捷伦仪器测量波长间隔为1nm，比分光光度计更为精确，测量更为自动化，也更为简便，时间更短。从图谱也可以看出，安捷伦仪器从300nm测到600nm，比分光光度计测量波长范围更广，但对于390nm一下的短波长光，会有一个变化和拱