22常见的细胞生物学检测分析.pptVIP

基本内容 一、细胞大小的测定 二、细胞数目的测定 三、细胞重量的测定 四、细胞活力的测定 五、染色体的核型和分带 六、课堂小结 七、作业 一、细胞大小的测定 一、细胞大小的测定 一、细胞大小的测定 测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两者配合使用，可以测量细胞大小。 目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片，圆片中央刻有一条直线，此线分为若干格。 物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.01mm(10μm)。 　　 一、细胞大小的测定 当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来标定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。 　　 一、细胞大小的测定 将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度： 目微尺每格所代表的实际长度=物微尺格数/目微尺格数*10mm 　　例如：目微尺是100格，其对应的物微尺是80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100×10=8μm。测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5格，则此细胞横径为8×5=40μm。 二、细胞数目的测定 二、细胞数目的测定 （一） 原理 　　取经一定稀释的细胞或小孢子原生质体悬液，把它注入血球记数板的记数室中，然后在显微镜下逐格计数。因为记数板是一块特制的载波片。其上由四条平行槽构成的三个平行台，中间的平台较宽，此平台的中间又被一短槽隔成两半,每边平台上面各刻有一个方格网，每个方格网共分九大格,中央大格即为此计数板的计数室。计数室的边长为1mm。中间平台下陷0.1mm,盖上盖片后计数室的容积为 0.1mm。所以,可根据在显微镜下观察到的细胞数目，换算成单位体积中细胞的数量。 二、细胞数目的测定 （一） 原理 　　 常用血球记数板的计数室有两种规格： 一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格； 另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。 不管是那种规格，其计数室的小格数总是相同的,既由400个小方格组成。计数时，通常只计5个中格的细胞数即可。 操作步骤 1、取样品：取悬浮细胞小孢子或原生质体悬液，稀释到一定比例。 2、检查记数板：在正式计数前，先用显微镜检查记数板的计数室，看其是否沾有杂质或干枯的菌体。若有污物，则需作以下几步清洗： （1） 擦洗。 用药棉蘸取95%酒精，轻轻擦洗计数板的计数室。 （2） 冲洗。 用蒸馏水冲洗计数板，并用毛边纸吸干其上的水分（注意：勿哟内火焰来烤干）最后用擦镜纸揩干净。 （3） 镜检。 镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时，才可用于细胞的计数。 操作步骤 3、加样：先将盖波片安方在计数室上面，然后摇匀样品取悬液，使它沿着盖波片和计数板间的缝隙渗入计数室，连续2-3次，直至充满计数室平台为止。 4、计数：将加好样品的记数板置于显微镜载物台的中央，然后按下列步骤操作： （1） 找计数室。先在低倍显微镜下寻找计数板上的大方格网位置。寻找时显微镜的光圈要适当缩小，使视野偏暗。然后顺着大方格线，移动计数板，使计数室位于视野中间。 （2） 转高倍镜。转至高倍镜后，适当调节光度，使细胞和计数室线条均清晰为止。然后将计数室一角的中格移至视野中。 操作步骤 （3）计数。通常以计5个中格的细胞值来代表计数室中的细胞量。将凡要计数的中格中的细胞逐一计数。计数时为了避免重复或遗漏，常将分布在格线上的菌体，一律以接触方格底线和有侧线上的菌作为计入本格内的菌数。以减少人为计数误差。将计的细胞数填入表格中。 （4）清洗。计数完毕后，记数板先用95%酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。 三、细胞重量的测定 2、干重 ① 将生长在固体培养基上的愈伤组织小心取出，放在称量瓶内，在60摄氏度烘箱内烘12～24小时。 ② 生长在液体培养基上的悬浮细胞，用抽滤法把它收集在预先称重的超滤器上，再用水洗，然后抽干细胞表面水，置60摄氏度烘箱中烘12～24小时。 ③ 烘干的材料放在分析天秤上称重，减去尼龙网或超滤器的重量。即得细胞材料干重。 1、四唑（zuo\）盐比色法（MTT） 优点：灵敏度高、方便 缺点：由于MTT经还原所产生的甲臜产物不溶于水，需被溶解后才能检测，这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响。MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不