纳米铜对猪肾细胞线粒体凋亡途径影响.pdf

纳米铜对猪肾细胞线粒体凋亡途径的影响 目 录 摘 要………………………………………………………………………………………i Abstract……．…．……．……．…．…………………．……．……．…．……．……………………．………………．……．iii 英文词汇缩写表…………………………………………………………………………．v 1前言………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1纳米材料及纳米铜概述…………………………………………………………．．1 1．2纳米铜在畜牧业上的应用………………………………………………………．．2 1．2．1纳米铜提高表观消化率与生产性能…………………………………………2 1．2．2纳米铜的类抗生素作用………………………………………………………2 1．2．3纳米铜对免疫系统的影响……………………………………………………3 1．2．4纳米铜的肝肾毒性……………………………………………………………3 1．2．5纳米铜与细胞凋亡……………………………………………………………3 1．3细胞的凋亡………………………………………………………………………．．4 1．3．1线粒体膜电位与细胞凋亡……………………………………………………5 1．3．2细胞色素C与细胞凋亡………………………………………………………5 1．3．3 Caspase家族与细胞凋亡……………………………………………………．．6 1．3．4 Bel．2家族与细胞凋亡………………………………………………………．．7 1．4本课题目的意义…………………………………………………………………一8 2材料和方法……………………………………………………………………………．9 2．1细胞株………………………………………………………………………………9 2．2实验试剂…………………………………………………………………………．．9 2．3实验仪器和设备…………………………………………………………………10 2．4溶液配制…………………………………………………………………………10 2．5细胞的培养………………………………………………………………………ll 2．6细胞的冻存与复苏………………………………………………………………．12 2．7细胞的爬片及HE染色…………………………………………………………．12 2．8细胞的AO／EB染色………………………………………………………………12 2．9Annexin—V 3 FITC／PI双染法检测细胞凋亡………………………………………l 2．10 JC法检测线粒体膜电位………………………………………………………．．14 华中农业大学2014届硕士研究生学位(毕业)论文 2．1l实时荧光定量PCR检测………………………………………………………．15 2．11．1细胞的分组与处理…………………………………………………………．15 2．1 5 1．2总RNA的提取………………………………………………………………1 2．11．3总RNA的纯度检测………………………………………………………．．15 2．11．4反转录………………………………………………………………………．15 2．11．5引物的设计及PCR…………………………………………………………16 2．11．6荧光定量PCR………………………………………………………………17 2．12实验数据分析与统计……………………………………………………………18 3结果与分析……………………………………………………………………………19 3．1PK-15猪肾细胞的培养…………………………………………………………．．19 3．2细胞AO／EB染色…………………………………………………………………19 3．3流式细胞仪检测细胞凋亡的比率…………………………